[发明专利]一种提高人工皮肤中附属器活性及控制其分布的方法

权利要求书

1.一种提高人工皮肤中附属器活性及控制其分布的方法，其特征在于，所述的方法包含：

步骤1、采用代表性细胞外基质成分生物材料构建适宜打印细胞的生物墨水；

步骤2、以生理浓度将适宜皮肤附属器生成的各类蛋白因子与生物墨水混合；

步骤3、向步骤2所得的混合液中加入细胞并混匀，选择打印参数后通过3D生物打印机，打印出带有活性皮肤附属器的人工皮肤模型；

步骤4、根据皮肤移植部位的个体化需求，调整细胞数量和各类蛋白因子的浓度，以及打印参数，并在打印后将所得的3D人工皮肤模型置于适宜不同附属器生长的培养条件下继续培养。

2.如权利要求1所述的提高人工皮肤中附属器活性及控制其分布的方法，其特征在于，所述细胞包含皮肤附属器细胞、个性化定制所需皮肤细胞，或者可以诱导皮肤附属器生成的成体干细胞；所述的个性化定制所需皮肤细胞包含汗腺细胞、毛囊细胞、皮脂腺细胞、表皮细胞、真皮成纤维细胞、脂肪细胞，以及黑色素细胞；所述的可以诱导皮肤附属器生成的成体干细胞包含间充质干细胞、表皮干细胞、毛囊干细胞，以及真皮干细胞。

3.如权利要求1所述的提高人工皮肤中附属器活性及控制其分布的方法，其特征在于，所述的代表性细胞外基质成分生物材料包含明胶、壳聚糖、透明质酸、胶原、水凝胶、海藻酸钠，以及合成性生物材料PLGA中的任意一种或多种的混合物。

4.如权利要求1所述的提高人工皮肤中附属器活性及控制其分布的方法，其特征在于，所述的各类蛋白因子是包含Cthrc1、EGF、BMP4、BMP5、bFGF、VEGF的诱导蛋白因子、生长因子以及趋化因子。

5.如权利要求1所述的提高人工皮肤中附属器活性及控制其分布的方法，其特征在于，所述的打印参数包含交联温度和时间，交联溶剂浓度，打印速度以及压力。

6.如权利要求1所述的提高人工皮肤中附属器活性及控制其分布的方法，其特征在于，所述的步骤3包含：

步骤3.1、将配置好的混合有各类蛋白因子的存储于4℃的生物墨水取出，在37℃充分溶解，将1ml细胞悬液加入20ml生物墨水中，缓慢上下颠倒混匀；

步骤3.2、将混匀的生物墨水移入3D生物打印机的打印筒，旋紧打印嘴活塞，使用封口膜封口；

步骤3.3、将打印筒放入10℃水中静置，待生物墨水转变为胶状时，用喷嘴进行打印；

步骤3.4、选择打印参数为：3D生物打印机的平台温度为10℃，喷头温度为8℃，打印速度为12mm/s，压力为0.1MPa～0.2MPa；

步骤3.5、将打印出的3D打印块用CaCl₂溶液进行交联；

步骤3.6、吸去残留的CaCl₂，用完全培养基洗两次，放入培养箱培养。

7.如权利要求6所述的提高人工皮肤中附属器活性及控制其分布的方法，其特征在于，所述的步骤3.1中，在37℃充分溶解是将装有生物墨水的离心管完全浸入37℃的水浴锅中，时间大于或等于1小时。

8.如权利要求6所述的提高人工皮肤中附属器活性及控制其分布的方法，其特征在于，所述的步骤3.1中，1ml细胞悬液中含有的细胞数大于或等于1.0×10⁷。

9.如权利要求6所述的提高人工皮肤中附属器活性及控制其分布的方法，其特征在于，所述的步骤3.3中，将打印筒放入10℃水中静置30min，待生物墨水转变为胶状时，用310μm喷嘴进行打印。

10.如权利要求6所述的提高人工皮肤中附属器活性及控制其分布的方法，其特征在于，所述的步骤3.5中，将打印出的3D打印块在4℃加入1ml质量浓度为10％的CaCl₂溶液作为溶剂，交联10min。