[发明专利]一种检测马兜铃酸A荧光传感器的制备方法

说明书

本发明公开了一种检测马兜铃酸A荧光传感器的制备方法，该方法首先合成碳量子点(CQDs)，然后合成卵白蛋白稳定的金纳米簇(OVA@AuNCs)，将碳量子点和卵白蛋白稳定的金纳米簇分别用超纯水溶解后，混合均匀，即制得检测马兜铃酸A荧光传感器；检测时，以碳量子点为主体，利用OVA@AuNCs增强碳量子点的荧光，然后通过加入马兜铃酸A将CQDs‑OVA@AuNCs的荧光猝灭；以CQDs‑OVA@AuNCs作为荧光传感平台，利用荧光猝灭的方式来定量检测马兜铃酸A；本发明方法克服了现有检测马兜铃酸A的技术方法过于复杂、检测速度慢及对马兜铃酸A识别性较低的缺陷；本发明方法简单、方便、快速、可控性高、高效，适于工业化生产及具有广阔的市场应用前景。

技术领域

本发明属于荧光传感器领域，具体涉及了一种检测马兜铃酸A荧光传感器的制备方法。

背景技术

肾毒性马兜铃酸是一种硝基菲啰啉羧酸衍生物，其来源于马兜铃科植物，例如马兜铃属和细辛属，大多数成分已被证实是肾毒性、致癌和诱变。其中，马兜铃酸A(AAs)毒性最大，并且引起了人们广泛关注。这些含AAs的草药已被广泛用作治疗肿瘤、蛇咬伤、小痘、风湿病和肺炎，直到AAs被证实是严重危害人体肾毒素的致癌物和致突变物。虽然，在世界范围内已经禁止使用含有AAs的草药。但这些草药目前仍然通过互联网销售，并且滥用含AAs的草药现象也屡禁不止。因此，高效准确的检测出马兜铃酸A对肾脏疾病的诊断和治疗具有重大的意义。

目前检测含AAs草药中的AAs及其类似物，主要有薄层色谱(TLC)、高效液相色谱和紫外检测(HPLC-UV)、高效液相色谱质谱(HPLC-MS)、毛细管电泳与电化学检测(CE-ECD)和酶联免疫吸附试验(ELISA)；但是现有这些检测方法存在检测步骤复杂，检测速度慢及对马兜铃酸A检出限较高的问题。

发明内容

本发明旨在解决现有马兜铃酸A检测方法过于复杂、检测速度慢及对马兜铃酸A识别性较低的问题，而提供一种检测马兜铃酸A荧光传感器的制备方法。

本发明首先合成碳量子点(CQDs)，然后用卵白蛋白稳定金纳米簇，构建荧光传感CQDs-OVA@AuNCs；使用时，利用随着马兜铃酸A(AAs)的浓度逐渐增加，荧光传感器的荧光逐渐猝灭，根据荧光强度变化与马兜铃酸A加入浓度的线性关系来定量检测马兜铃酸A。

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

本发明荧光传感器的制备方法如下：

(1)将活性炭与混酸混合后，置于80-90℃下回流反应，冷却至室温，在反应产物中添加混酸体积2-3倍的水，然后用氢氧化钠调节pH至12-14后放入水热反应釜中反应13-15小时，再调节pH至中性，最后将中性产物用超纯水透析2-3天，将透析袋内产物干燥后得到碳量子点，其中活性炭与混酸的质量体积比mg:mL为8-12:1；

(2)在浓度为8-12mg/mL卵白蛋白(OVA)液体中加入氯金酸溶液，超声5-10min后搅拌15-30min；用0.5-1mol/L氢氧化钠调pH至12-13；然后在30-45℃水浴反应10-12小时，反应产物干燥后得到卵白蛋白稳定的金纳米簇(OVA@AuNPs)，其中卵白蛋白液体与氯金酸溶液的体积比为4-6:1；

(3)将碳量子点和卵白蛋白稳定的金纳米簇分别用超纯水溶解后，混合均匀，即制得检测马兜铃酸A荧光传感器(CQDs-OVA@AuNCs)，其中碳量子点和卵白蛋白稳定的金纳米簇的质量比为1300-1500:1。

所述混酸为是浓硫酸和浓硝酸按体积比2-3.5:1组合而得，浓硫酸和浓硝酸均为市购产品。

所述步骤(1)中氢氧化钠浓度为5～6mol/L；用1mol/L的硫酸调节pH至中性。

所述制备碳量子点时，在水热反应釜中的反应温度为150-170℃。

所述氯金酸溶液浓度为8-12mmol/L。