[发明专利]一种藁杆双脐螺的分子鉴定方法在审
| 申请号： | 201811528514.9 | 申请日： | 2018-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN109706249A | 公开（公告）日： | 2019-05-03 |
| 发明（设计）人： | 吕志跃;黄萍;胡玥;马玉斌;周洪利;周旻昱 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6869;G16B10/00 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 杆双 分子鉴定 遗传距离 进化树 总DNA 待测样品 检测引物 快速鉴定 扩增产物 特异基因 序列比对 有效实现 传统的 测序 构建 聚类 扩增 物种 应用 | ||
1.一种藁杆双脐螺的分子鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.提取待测样品总DNA；
S2.以步骤S1总DNA为模板，分别扩增其COI基因和16S rDNA基因；
S3.对步骤S2的扩增产物进行测序，与藁杆双脐螺和扁蜷螺的COI基因和16S rDNA基因进行序列比对并构建进化树，计算物种间遗传距离；根据进化树聚类关系以及遗传距离鉴定藁杆双脐螺。
2.根据权利要求1所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述扁蜷螺为大脐圆扁螺、凸旋螺或小旋螺中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述COI基因的PCR扩增引物对包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1～2所示。
4.根据权利要求1或2所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述16S rDNA基因的PCR扩增引物对包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3～4所示。
5.根据权利要求1或2所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述藁杆双脐螺的COI基因的核苷酸序列如KF926188所示或与所示序列具有至少99%序列同源性的序列。
6.根据权利要求1或2所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述藁杆双脐螺的16S rDNA基因的核苷酸序列如KY697223或AY030213所示，或与所示序列具有至少99%序列同源性的序列。
7.根据权利要求3所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述COI基因的PCR扩增反应体系为50μL反应体系：50 ng DNA，20μM引物，45μL PCR Mix；PCR反应程序为：98℃预变性2min；98℃变性10s，45℃退火30s，72℃延伸15s，共28个循环；72℃延伸3min。
8.根据权利要求4所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述16S rDNA基因的PCR扩增反应体系为50μL反应体系：50 ng DNA，20μM 引物，45μL PCR Mix；PCR反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性10s，50℃退火30s，72℃延伸15s，共35个循环；72℃延伸5min，4℃保存。
9.权利要求1～8任一项所述方法在制备藁杆双脐螺检测、鉴定试剂盒中的应用。
10.一种藁杆双脐螺检测、鉴定试剂盒，其特征在于，包含SEQ ID NO：1～2和SEQ IDNO：3～4所示PCR扩增引物。
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