[发明专利]一种细菌性角膜炎动物模型及其构建方法和应用

说明书

本发明提供了一种细菌性角膜炎动物模型及其构建方法和应用，所述构建方法包括以下步骤：S1、麻醉下在实验小鼠的眼球角膜表面划三条平行切口，深度割破角膜上皮层但不超过角膜内皮层，在角膜切口区域滴加1‑10ul携带荧光标记基因的绿脓杆菌悬液，静置后自然复苏；S2、将经步骤S1处理后的实验小鼠每日进行观察角膜感染情况，并检测角膜荧光情况。该构建方法简便，并可成功建立稳定的细菌感染性角膜炎动物模型；且采用携带荧光标记基因的绿脓杆菌感染活体角膜组织，可在生物活体荧光成像系统下实时定量观察角膜感染情况，进而可广泛应用于细菌感染性角膜炎的致病机制、治疗效果评价等多方面的研究。

技术领域

本发明涉及眼科医学模型领域，具体地说，涉及一种细菌性角膜炎动物模型及其构建方法和应用。

背景技术

细菌性角膜炎是一种致盲性眼病，其危险因素包括眼外伤、角膜接触镜佩戴、眼部手术、干眼症、激素类药物长期使用以及机体免疫功能低下。细菌性角膜炎常见致病菌主要有绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等。细菌性角膜炎需要及时治疗以减轻角膜组织的损害、减少角膜瘢痕形成，进而预防进一步的视力损害。随着抗生素的广泛使用，目前由耐药性细菌感染造成的细菌性角膜炎屡见不鲜，如何有效控制这类角膜炎感染病情是亟待解决的临床问题。因而，构建细菌性角膜炎动物模型，对于细菌性角膜炎相关的基础研究以及未来的临床转化，均具有十分重要的意义。

目前常用的感染性角膜炎模型多为损伤性，主要有角膜划痕法、角膜环钻法、基质注射法等，目的是造成角膜基质层损伤，便于细菌自角膜表面侵袭感染。但这些模型最大的不足之处在于，如需检测角膜感染情况，则需要先处死实验动物取出角膜后，才能进行细菌学检测，无法在活体上实时连续监测，不利于角膜炎治疗相关研究的观察分析。因而亟需建立一种可实时监测角膜感染情况的角膜炎动物模型。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，针对现有技术不足，提供一种细菌性角膜炎动物模型及其构建方法和应用。该菌性角膜炎动物模型的构建方法简便、高效，并且能在生物活体荧光成像系统下实时定量观察角膜炎情况，进而可广泛应用于细菌感染性角膜炎的致病机制、治疗效果评价等多方面的研究。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种细菌性角膜炎动物模型的构建方法，包括以下步骤：

S1、麻醉下在实验小鼠的眼球角膜表面划三条平行切口，深度为割破角膜上皮层但不超过角膜内皮层，在角膜切口区域滴加1～10ul绿脓杆菌悬液，静置后自然复苏；

S2、将经步骤S1处理后的实验小鼠每日进行观察角膜感染情况，并检测角膜荧光情况。

优选地，步骤S1中，所述实验小鼠为无眼部疾患的雌性健康小鼠；雌性小鼠不易激惹，便于后续多次麻醉成像进行观察。

优选地，步骤S1中，所述绿脓杆菌悬液中的细菌量为1×10⁵CFU～1×10⁶CFU。所述细菌量过低不容易造成有效的角膜感染浓度过高容易出现严重感染引起眼内炎而超出角膜感染模型的范畴，因此细菌量浓度过低或过高都不利于控制该动物模型的稳定性。

优选地，步骤S1中，所述绿脓杆菌悬液的制备方法如下：将携带荧光标记基因的绿脓杆菌菌株ATCC 19660，在脑心浸液肉汤中37℃摇晃孵育过夜，4000rpm离心后，加入PBS溶液重悬即得。

优选地，所述脑心浸液肉汤中含有浓度为10～100ug/ml的卡那霉素。

优选地，所述步骤S2中，采用生物活体荧光成像系统检测实验小鼠角膜荧光情况，并对荧光图像进行定量分析。

本发明还提供了一种根据前述方法构建的细菌性角膜炎动物模型。

本发明还提供了一种细菌性角膜炎动物模型在研究细菌性角膜炎中的应用。