[发明专利]一种鉴定鮈亚科鱼类的方法

权利要求书

1.一种鉴定鮈亚科鱼类的引物，其特征在于，所述引物序列为：

F：5’-TACCTGTGGCAATTACRCGCTGAT-3’；SEQ ID NO：1；

R：5’-TAAGARTAAAATGGTCCYAAACC-3’；SEQ ID NO：2；

其中，R代表A或者G；Y代表C或者T。

2.一种鉴定鮈亚科鱼类的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)确定鮈亚科鱼类的特异性引物：

①根据鮈亚科不同种鱼类线粒体COI基因序列，选取不同序列之间的保守片段；

②根据步骤①选取的保守片段，设计并筛选出鮈亚科鱼类的特异性引物；

③利用步骤②获取的特异性引物，对鮈亚科鱼类及其他鱼类的基因组DNA进行PCR扩增，获得扩增产物；

④将步骤③获得的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，鮈亚科鱼类能够扩增出条带；回收条带，进行测序；

⑤将步骤④测序所得序列进行比对，下载相似度高及其近缘种序列，构建系统发育树，计算遗传距离，当序列间遗传距离小于0.02时，初步确定该序列为鮈亚科鱼类序列，从而确定鮈亚科鱼类的特异性引物；

(2)鉴定鮈亚科鱼类：

①利用步骤(1)获得的特异性引物，对需要鉴别的鱼类DNA样本进行PCR扩增，获得扩增产物；

②将步骤①获得的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，获得目的条带，回收目的条带，进行测序；

③将步骤②测序所得序列进行比对，下载相似度高及其近缘种序列，构建系统发育树，计算遗传距离；

④根据步骤③获得的遗传距离鉴定鮈亚科鱼类。

3.根据权利要求2所述的一种鉴定鮈亚科鱼类的方法，其特征在于，所述鮈亚科鱼类为多纹颌须鮈、点纹银鮈、犬首鮈、长体小鳔鮈、乐山小鳔鮈或中间银鮈等鮈亚科鱼类代表种。

4.根据权利要求3所述的一种鉴定鮈亚科鱼类的方法，其特征在于，所述鱼类基因组DNA的提取方法如下：取在55℃条件下烘干4h的酒精浸泡的鱼类组织或新鲜的鱼类组织，置于1.5ml离心管，加入DNA提取液和蛋白酶K，消化过夜，用酚-氯仿法提取基因组DNA。

5.根据权利要求4所述的一种鉴定鮈亚科鱼类的方法，其特征在于，所述鱼类组织为鱼的肌肉、鱼鳍或鱼卵。

6.根据权利要求5所述的一种鉴定鮈亚科鱼类的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：DNA模板1μL，上下游引物(F,R)各1.5μL，ddH₂O 11μL，Mix 15μL，终反应体系为30μL；所述PCR扩增的反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30S，55℃退火30S，72℃延伸1min，循环30次；72℃延伸10min。