[发明专利]一种细菌总数的快速检测方法

说明书

本发明提供了一种细菌总数的快速检测方法，属于细菌总数检测方法技术领域。本发明提供的快速检测方法，包括以下步骤：待测样本液和体细胞ATP释放剂反应，再添加ATP发光试剂反应，再添加细菌ATP释放剂反应；荧光检测仪检测所得反应液；将得到的荧光数据代入换算公式a中计算，得到待测样本液中细菌数量。采用体细胞ATP释放剂和ATP发光试剂分步添加消耗待测样品中体细胞中ATP和游离ATP后，再在细菌ATP释放剂作用下使细菌ATP释放，实现仅检测细菌ATP产生的荧光信号的目的。本检测方法实现利用ATP检测仪准确对细菌计数的目的，还具有检测灵敏度高、检测时间短的特点，应用范围广。

技术领域

本发明属于细菌总数检测方法技术领域，具体涉及一种细菌总数的快速检测方法。

背景技术

细菌计数是应用范围较广的研究手段，例如水体中细菌的分布是检测水体受污染程度的一个重要指标，而研究细菌的分布是检测水体中受污染程度的一个重要指标，而研究细菌分布情况最重要的是对细菌数量的准确测定，这对环境评价以及实际工程应用具有重要意义。再例如，筛查尿路是否发生感染时需对尿液中细菌数量做检测，由此可知，细菌计数在筛查尿路感染中具有临床意义。因此，提供一种简便快速的细胞总数的检测方法具有重要意义。

目前，细菌计数的方法主要包括计数器计数法、比浊法、培养法等等。计数器计数法即用血细胞计数器进行计数。由于计数室的体积是一定的(0.1mm³)，可根据计数器刻度内的细菌数计算样品中的含菌数。此方法属于手工检测，细菌浓度要求严格(一般细菌浓度在10⁴～10⁷个/ml)，需要专业人员完成，耗时长，最后分析结果可能会因为操作人员的改变而出现差距。培养法是日常生活、生产检测以及实验室检测最常用的活菌计数法，包括平板培养法和涂布培养法，是根据每个活的细菌能生长出一个菌落的原理设计的。培养法成本低、操作简单，培养结果以30～300个菌落为宜，因而待测菌液浓度要求严格，且培养周期长(一般需要24～48h)，操作环境要求严格。比浊法又称浊度测定法，是根据液体的浑浊程度反推液体中悬浮物的浓度。细菌的生长使得培养液变浑浊，在一定波长范围内，菌液的浓度和浑浊度成正比，用分光度计测定浑浊度，即可推算出细菌浓度。这种方法简单、操作便捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，精确度低，对颜色太深的样品不能用此法测量。

目前，还有一种快速评价细菌污染程度的方法-ATP法。三磷酸腺苷(AdenosineTriphosphate，ATP)是一切生命体能量的直接来源，普遍存在于动植物细胞、微生物和食物残留中。ATP荧光检测法是根据萤火虫发光原理开发的快速检测技术。在有氧条件下，虫荧光素酶可催化虫荧光素和ATP之间发生氧化反应形成氧化荧光素并发出荧光，发出的荧光强度与ATP含量呈正比例关系。通过测试荧光信号的强度可得知待测目标被污染的程度，因此检测ATP可作为判断是否洁净的直观指标。

但是ATP法只能检测到目标物被污染的程度，即细胞内、细胞外所有ATP的值，包括游离、动植物体细胞以及细菌细胞内的ATP。动植物体细胞中所含的ATP量是细菌ATP量的100～1000倍，而释放生物细胞外的游离ATP同样也会对细菌ATP检测产生影响，因而如果要用ATP法检测细菌数量的话，必须排除游离、动植物体细胞ATP对检测的影响。当前的ATP法检测仪无法区分当前发光值是由于生物细胞释放到体外的游离ATP造成的，还是动植物、微生物细胞内ATP造成的，因而无法直接应用到细菌检测中去。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种细菌总数的快速检测方法，实现利用ATP检测仪准确对细菌计数的目的。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种细菌总数的快速检测方法，包括以下步骤：

1)待测样本液和体细胞ATP释放剂混合反应，得到除体细胞ATP溶液；