[发明专利]一种增强腺病毒载体生物制品感染靶细胞的方法

说明书

本发明公开了一种增强腺病毒载体生物制品感染细胞的方法，在使用腺病毒感染人或猕猴PBMC的过程中加入GM‑CSF，IL4等细胞因子，能够显著促进腺病毒的感染。相对于现有的离心等方法而言，本发明安全可行，操作更简便。普遍应用于；可用于腺病毒载体的细胞免疫疗法，日后致力用于肿瘤和传染性疾病的研究。

技术领域

本发明属于医药领域，特别涉及一种增强腺病毒载体生物制品感染靶细胞的方法。

背景技术

腺病毒是目前应用最为广泛的疫苗载体，据报道临床应用的基因治疗载体21.2％为腺病毒载体。其中C家族腺病毒包括Ad2和Ad5，具有较好的安全性、宿主细胞广泛、容纳外源基因能力强、便于生产和储存等许多优点，且腺病毒基因组不被整合染色体中，不会导致宿主基因的插入突变，因此它被广泛地应用于体外基因转导，体内接种疫苗和基因治疗等各个领域。Ad5载体的P53和溶瘤Ad5腺病毒被批准用于癌症的临床治疗，Ad5载体的埃博拉疫苗也已在临床试验中被测试。

DC(树突状细胞)是一种抗原呈递细胞，能够吞噬抗原将将其裂解成小分子多肽再呈递给T细胞，因此在起始和调控适应性免疫应答中发挥重要作用。因此将腺病毒载体疫苗靶向于DC细胞能够明显增强疫苗的免疫效果。一般来说，这种细胞免疫疗法的程序是先用腺病毒载体产品体外感染自体DC或者PBMC(外周血单个核细胞)细胞，然后将感染的细胞回输到体内用于治疗肿瘤和一些感染性疾病。另一方面，这种方法也因将腺病毒“藏匿”在细胞中，从而躲过了机体预存的抗腺病毒免疫反应的识别，从而避免了腺病毒预存免疫反应对腺病毒载体重复免疫的不利影响。

其中柯萨奇病毒—腺病毒受体(CAR)和整合素受体在腺病毒进入宿主细胞的过程中发挥关键作用。然而研究发现人类DC和PBMC(外周血单个核细胞)表面中CAR和整合素受体的表达水平很低，因此腺病毒很难将基因递送到细胞中。为了增强腺病毒进入靶细胞的效率，很多研究采用离心的的方式来促进腺病毒进入细胞。离心能够有效地促近腺病毒进入细胞，但同时它也很容易影响细胞的活性，且程序繁琐，对实验室条件有较高要求，因此难以在临床中广泛应用。因此寻找一种更加简便、有效地促进腺病毒进入DC细胞的方法，具有重要的临床意义。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种增强腺病毒载体生物制品感染靶细胞的方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种促进腺病毒感染PBMC和/或DC细胞的方法，加入细胞因子与PBMC和/或DC细胞共同孵育。

进一步的，所述的细胞因子为GM-CSF或IL4。

进一步的，所述的GM-CSF孵育剂量为20～40ng/ml。

进一步的，所述的IL4孵育剂量为10～20ng/ml。

进一步的，所述的腺病毒为Ad2或Ad5。

细胞因子在制备促进腺病毒感染PBMC和/或DC细胞的试剂中的应用。

进一步的，所述的细胞因子为GM-CSF或IL4。

进一步的，所述的腺病毒为Ad2或Ad5。

GM-CSF和/或IL4在制备促进细胞表面整合素受体和SR-A受体的试剂中的应用。

进一步的，所述的整合素受体为avβ5受体。

本发明的有益效果是：

在腺病毒体外感染PBMC/DC细胞的过程中加入GM-CSF,IL4细胞因子，细胞表面整合素和SR-A受体上调表达，Ad2/Ad5感染靶细胞的效率明显增强。本发明安全可行操作快速简便，可用于腺病毒载体疫苗的DC细胞疗法，在临床上得到更为广泛的应用。

附图说明