[发明专利]一种检测Ⅲ型前胶原N端肽的试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测Ⅲ型前胶原N端肽的试剂盒，包括结合有Ⅲ型前胶原N端肽的固相载体；Ⅲ型前胶原N端肽系列校准品；兔抗Ⅲ型前胶原N端肽多克隆抗体溶液；酶标记的鼠抗兔IgG溶液。本发明试剂盒检测时，由于反应的第一步是兔源抗体，而辣根酶标记的鼠抗兔IgG抗体是在反应的第二步添加，不会直接接触到样本，因此反应全程均不会受到HAMA样本的干扰，能够简便、快速、灵敏、准确的检测Ⅲ型前胶原N端肽。

技术领域

本发明涉及免疫分析医学，尤其是涉及一种采用竞争法原理设计的利用化学发光免疫分析技术检测Ⅲ型前胶原N端肽（N-Terminal Propeptide of Type Ⅲ Collagen，以下简称PⅢNP）的试剂盒。

背景技术

PⅢNP是Ⅲ型前胶原经氨基端内切肽酶的作用脱下的多肽。完整的Ⅲ型前胶原肽主要由肝脏通过窦状隙内皮细胞受体介导的内吞作用被清除，而小片段则主要由肾脏排泄清除，故胶原代谢活跃及肝功能损伤时，血清PⅢNP增高，因此PⅢNP被视为肝纤维化生成的血清学指标。PⅢNP在肝纤维化病人血清中水平的上升与组织学上的表现，如炎症和纤维化的活动程度有伴随关系。测定PⅢNP的含量可以有效地区别轻型与中重型慢性肝炎，提示活动性肝纤维化，是反映慢性肝纤维化活动性和程度的指标。长期随访血清PⅢNP含量能判定慢性肝病的预后。对原发性胆汁性肝硬化、慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、自身免疫性肝炎进行2～10年随访，无论药物治疗与否，原发性肝硬化者血清PⅢNP总是升高，接受肝移植后，PⅢNP含量降至正常；慢性迁延性肝炎PⅢNP含量在正常上限；发展成肝硬化的慢性活动性肝炎其血清PⅢNP水平持续升高，转入缓解期则血清PⅢNP值正常。唯自身免疫性肝炎例外，血清值一直不高，而陈旧性肝硬化和部分晚期肝硬变、肝萎缩患者血清PⅢNP则不一定增高。综上所述，血清PⅢNP可评估慢性肝病，特别是慢性活动性肝炎纤维化过程，其临床判断预后价值已被公认。

目前对PⅢNP含量的测定方法有：Elisa 测定方法，该方法一般用于半定量的测定，测定准确度、灵敏度、精密度较差，而且操作比较繁琐，不利于在临床中广泛应用。放射免疫测定方法，该方法因为试剂有放射性污染和试剂有效期短暂（半衰期）等缺陷在逐渐被淘汰。

化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析方法，是继放射免疫分析(RIA)和酶免疫分析(EIA)之后发展起来的一种超高灵敏度的微量测定技术，具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是目前免疫定量分析最理想的方法。

现有基于化学发光免疫分析技术检测PⅢNP的试剂盒均为双抗体夹心法。众所周知，夹心法检测高浓度样本会发生HOOK效应，导致检测结果假性偏低，引起临床误判。而且双抗体夹心法制备的检测试剂盒至少用到一株鼠单抗，若待检样本中有人抗鼠抗体（Humananti mouse antibody，HAMA），检测结果会受到干扰，导致假阳性或异常偏高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用竞争法原理设计的利用化学发光免疫分析技术检测Ⅲ型前胶原N端肽的试剂盒。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的检测Ⅲ型前胶原N端肽的试剂盒，包括结合有Ⅲ型前胶原N端肽的固相载体；Ⅲ型前胶原N端肽系列校准品；兔抗Ⅲ型前胶原N端肽多克隆抗体溶液；酶标记的鼠抗兔IgG溶液。

所述固相载体为粒径为0.1-5um的羧基化、氨基化、巯基化或甲苯磺酰基化的磁微粒。

所述Ⅲ型前胶原N端肽为天然纯化或重组的Ⅲ型前胶原N端肽抗原。