[发明专利]一种单克隆抗体ZKns2E11及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种单克隆抗体ZKns2E11及其应用。本发明提供的单克隆抗体ZKns2E11是一种针对寨卡病毒NS1蛋白的全人源单克隆抗体，包括具有如SEQ ID NO.1所述氨基酸序列的重链可变区域和如SEQ ID NO.2所述氨基酸序列的轻链可变区域。本发明提供的单克隆抗体ZKns2E11中的重链和轻链是自然配对，故抗体的亲和力高，与寨卡病毒NS1蛋白特异性结合，不与登革病毒NS1交叉，可以作为诊断或治疗性抗体。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种单克隆抗体ZKns2E11及其应用。

背景技术

2015年至2016年寨卡病毒(ZIKV)在世界范围尤其是美洲地区迅速传播， 因其可导致严重的出生缺陷及成人神经系统并发症，已被WHO宣布为国际公共 卫生紧急事件。

ZIKV同样经伊蚊传播，常出现在登革病毒(DENV)流行区。ZIKV与DENV 常出现在同一地区，但临床特征、危害及处置不同。急需尽早区别这两种病毒感 染，尤其是对怀孕的妇女而言。ZIKV和DENV同属黄病毒，亲缘关系相近。由 于基因组和蛋白质序列及构象上的相似所导致的交叉反应，为区分这两种病毒感 染带来了困难。

血清多克隆抗体及从感染者分离的单抗研究表明，ZIKV诱导宿主产生的针 对病毒膜蛋白E抗体存在广泛的交叉反应。而针对病毒非结构蛋白1(NS1)的 抗体呈现高度特异性反应，为鉴别这两种病毒感染提供了可能。Balmaseda等 (2017年)用从ZIKV感染者分离仅结合ZIKV NS1单抗，建立了基于NS1的 竞争ELISA法，用于ZIKV感染诊断，并区别其它黄病毒如登革4个血清型、 西尼罗病毒及黄热病毒。

目前，针对ZIKV尚无有效的疫苗，更缺乏早期诊断及有效的治疗方法。 NS1蛋白在黄病毒生命周期中起着重要作用，包括病毒复制、免疫逃逸以及在致 病机制中的作用。已明确NS1在登革热发病机制中起着重要作用，与疾病的严 重性相关。因此针对寨卡病毒NS1蛋白的全人单抗可能成为寨卡病毒病治疗的 一种策略。

单抗的制备技术经历了鼠源抗体的杂交瘤技术、鼠人嵌合抗体、鼠抗体人源 技术、继而出现人单抗制备技术。目前可用于大规模特异性抗体筛选的主要为噬 菌体展示技术及单个B细胞抗体技术。噬菌体展示技术可用于筛选分离针对任 何靶抗原的抗体。然而从随机组合抗体的重链及轻链库中筛选出的特异性抗体， 其重链和轻链配对不是自然产生抗体原有的，影响抗体的亲和力和功能。单个B 细胞抗体技术直接从单个B细胞扩增抗体重链和轻链的可变区基因，构建抗体 表达质粒，继而在细胞培养体系中表达抗体。这种技术可分离主要存在感染者体 内构象特异的功能性抗体。

中国专利申请CN107188935A公开了一种寨卡病毒NS1抗原突变体及其应 用，该抗原突变体通过对同源性高的片段进行基因敲除突变，然后经基因合成， 载体构建，原核表达，抗原纯化及免疫学功能性分析筛选获得，具有降低登革阳 性样本检出率的作用。但是，这种抗原突变体突变率低，只是降低了寨卡病毒与 登革病毒抗体检测的交叉，无法根除。

综上可知，现有技术中存在特异性低，无法彻底区分寨卡病毒与登革病毒， 筛选过程繁琐等缺点。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点与不足，提供一种单克隆抗体ZKns2E11及其应用。本发明提供的单克隆抗体ZKns2E11具有亲和力高，可用 于区别寨卡病毒和登革病毒感染的优点。

目前，针对寨卡病毒病这一新发感染性疾病尚无有效的疫苗，更缺乏早期诊 断及有效的治疗方法。本发明通过对有限数目记忆B细胞的培养，筛选并获得 抗体重链和轻链的可变区基因，构建抗体表达载体，继而在细胞培养体系中表达 抗体。本方法适用于构建全人源单克隆抗体。

为了达到上述目的，本发明提供了一种单克隆抗体ZKns2E11，包括重链和 轻链，所述重链可变区域的氨基酸序列信息如SEQ ID NO.1所示；所述轻链的 可变区域的氨基酸序列信息如SEQ ID NO.2所示；