[发明专利]三七根腐病致病菌轮枝镰刀菌的Real-timePCR检测引物及方法有效
| 申请号： | 201811517612.2 | 申请日： | 2018-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN109439791B | 公开（公告）日： | 2021-11-23 |
| 发明（设计）人： | 刘迪秋;李欣;崔秀明;邱炳玲;张应鹏;李珊 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/77 |
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| 地址： | 650093 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 三七 根腐病 致病菌 镰刀 real timepcr 检测 引物 方法 | ||
1.一种检测三七中根腐病致病菌轮枝镰刀菌的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）提取三七样品或土壤的DNA；
（2）以提取DNA为模板进行实时荧光定量PCR扩增，扩增程序为95℃ 2 min，然后进行45个循环反应，每个循环反应为95℃ 1 min，62℃ 30 s，72℃ 1 min，于72℃ 时测定荧光值，每个循环结束后收集并记录荧光信号；
（3）实时荧光定量PCR标准曲线的建立
制备浓度在0.004ng/μL～40ng/μL范围内的重组质粒pGEM-T-
（4）若出现荧光信号则可判定所检测样品中存在根腐病致病菌轮枝镰刀菌，并将获得的Ct值带入构建的标准曲线中，计算得到检测样品中轮枝镰刀菌的数量；
实时荧光定量PCR的反应体系为20μL，其包含2×SYBR Green Mix 10μL、无核酸酶水7μL、上游引物Fv-QF 1 μL，下游引物Fv-QR 1 μL、DNA模板1μL；
上游引物Fv-QF:5’GTCAGCGTTCTTATTACGGATGC3’
下游引物Fv-QR:5’TGTTGGAGGTAGTTACCCTATGTTCA3’。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：上游引物Fv-QF和下游引物Fv-QR的浓度均为2μmol/L。
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