[发明专利]三七根腐病致病菌尖孢镰刀菌的Real-timePCR检测引物及检测方法

说明书

本发明公开了一种三七根腐病致病菌尖孢镰刀菌的Real‑time PCR检测引物及检测方法，检测引物的核苷酸序列为：上游引物Fo‑QF:5’CTCAAACAGTGGTACATGCGAGG3’；下游引物Fo‑QR:5’CATCTAGGTCTTCCATCCACTTGA3’；本发明设计尖孢镰刀菌的特异性引物，建立标准曲线用于尖孢镰刀菌的定性定量分子检测和病害准确诊断；利用本发明的技术和方法能快速获得复杂的三七种植土壤以及三七病株中尖孢镰刀菌的数量动态变化，因而可以为三七土壤处理、根腐病的早期诊断和动态监测以及带病三七种子、种苗的分子检测提供技术支持。

技术领域

本发明涉及一种三七根腐病菌尖孢镰刀菌的Real-time PCR检测引物及其检测方法，专用于三七根腐病菌尖孢镰刀菌的快速分子检测，同时可实现田间三七根腐病菌的早期诊断和病菌的动态变化监测，还可以用于三七种植土壤以及种子、种苗的带菌检测，属于植物病害的分子生物学检测领域。

背景技术

三七(Panax notoginseng (Burk) F.H. Chen )别名田七、山膝、田三七、参三七、血参、滇三七等，有“南国神草”、“金不换”之美誉。三七用于治疗疾病已几百年的历史，《本草纲目》中记载三七具有止血散血定痛之功效，对刀伤、箭伤、跌打损伤、出血不止有特效，同时三七还具有消肿止痛、抗炎、抗衰老、提高免疫力等多种功效 (张静静, 刘桂芹, 王庆鹏. 植物三七中皂苷类化学成分的研究进展.聊城大学学报(自然科学版), 2018,31 (2):43-59.)。三七含有多种化学成分，其中三七总皂苷为主要有效活性成分之一，其含量约为8%～12%。此外，三七中还含有醇类、黄酮类、核苷类、生物碱、蛋白质、维生素C等化合物及钾、镁、钙等多种无机元素，为三七具有多种功效的特质基础。

三七具有抗血小板聚集及溶栓作用，三七总皂苷主要通过改善血管内皮的功能，改善血流状态，改善血液成分来达到抑制血小板黏附和聚集抗血栓形成的目的(Wang J,Huang ZG, et al. Screening of anti-platelet aggregation agents from Panax notoginseng using human platelet extraction and HPLC–DAD–ESI‐MS/MS. Journalof Separation Science , 2015 , 31 (6‐7) :1173-1180.)。三七皂苷可明显降低实验性血栓形成，并且以剂量依赖方式抑制凝血酶诱的血小板聚集，还可抑制凝血酶诱导的正常血压及肾性高血压大鼠血小板内游离钙浓度升高。三七还影响血压，三七总皂苷具有直接扩张血管，降低血压作用。目前普遍认为三七皂苷为钙通道阻滞剂，其扩血管机制可能是三七皂苷具有阻断去甲肾上腺素所致的Ca²⁺内流的作用。还具有降低动脉压及略减心率的作用，使心脏工作量减低(Liu Y, Hao F, et al. Panax notoginseng saponins promoteendothelial progenitor cell mobilization and attenuate atheroscleroticlesions in apolipoprotein E knockout mice. Cellular Physiology Biochemistry, 2013 , 32 (4) :814-826.)。三七还具有抗动脉粥样硬化作用。以三七为主要成分的复方血栓通胶囊具有扩张细动脉和细静脉的口径，改善微循环，增加组织的血流灌注量，延长组织缺氧生存时间。