[发明专利]纳米金-原卟啉铜（Ⅱ）高灵敏检测H2

说明书

本发明公开了纳米金‑原卟啉铜(Ⅱ)高灵敏检测H₂O₂电化学传感器的构建及其应用。本发明利用PEI的还原性和稳定性制备出纳米金，通过酰胺键与原卟啉铜(Ⅱ)相结合制备出纳米金‑原卟啉铜(Ⅱ)，并将其修饰在玻碳电极表面利用电化学方法对过氧化氢进行检测。结果表明，最优条件下，在一定范围内H₂O₂的浓度与电流信号呈现正相关，检测线性范围0.9～7.9fmol/L，相关系数为0.9945，检出限91.74amol/L，其稳定性较好表现在3天后该传感器电流信号为初始值的106.04％，抗干扰性达到99.59～102.89％。本发明传感器对过氧化氢的检测具有灵敏度高，稳定性高，抗干扰性强等特点，为后期应用于临床葡萄糖的检测及医学领域奠定了基础。

技术领域

本发明涉及一种H₂O₂传感器的构建及其应用，具体涉及一种纳米金-原卟啉铜(Ⅱ)(PEI-AuNPs-CuPP)仿生酶及其制备的电化学传感器和应用，属于生物分析技术领域。

背景技术

纳米技术的快速发展为新型仿生材料的制备提供了广阔的发展空间。在常用的纳米粒子中，纳米金(PEI-AuNPs)通常被认为是理想的纳米材料。研究表明，纳米金具有良好的生物相容性、导电性和化学稳定性，其较大的表面积和稳定性为DNA，抗体，酶等提供了良好的固定平台。目前，纳米金的合成技术已相对成熟，其中大部分是基于HAuCl₄还原反应。研究表明，当聚乙烯亚胺(PEI)作为还原剂制备纳米金时反应条件温和，操作简单，无污染物生成，并且PEI具有稳定金纳米颗粒的作用，可防止纳米金的聚沉。

过氧化氢是一种重要的生物标志物，广泛应用于临床检测、环境监测、药物合成和食品生产等领域。研究发现体内过量的H₂O₂可引起阿尔茨海默氏症、帕金森氏症等其他中枢神经系统疾病。因此开发灵敏度高、检测限低、操作简便的H₂O₂检测方法在生理学、病理学等领域有十分重要的意义。

目前常用的过氧化氢的检测方法有分光光度法、光谱法、化学发光法和电化学法等。其中电化学方法因检测灵敏，精确度高，成本较低，操作简单等优点而具有很高的研究价值。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供纳米金-原卟啉铜(Ⅱ)高灵敏检测H₂O₂电化学传感器的构建及其应用。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种纳米金-原卟啉铜(Ⅱ)仿生酶，制备方法为：

(1)将CuPP溶于DMF中制成浓度为0.1mmol/L的CuPP溶液；

(2)将CuPP溶液与纳米金溶液以体积比1.2:1的比例混合，搅拌1h；

(3)搅拌后，离心；

(4)弃上清液，洗涤沉淀，并离心；

(5)弃上清液，将沉淀真空干燥，干燥后加入甲醇，4℃保存备用。

纳米金溶液的制备方法为：称取2.06g PEI与340μL质量分数2％的HAuCl₄溶液混合，再加入1960mL超纯水，边搅拌边间歇式升温加热到80℃，观察溶液颜色变化，当溶液变为浅宝石红色时，停止加热，继续搅拌至室温，即得。

间歇式升温为：由室温升温至80℃，每升温5℃，保温1-2min。

步骤(3)中离心的温度为4℃，转速为14000rpm，时间为75-85min。

步骤(4)中离心的温度为4℃，转速为14000rpm，时间为40-50min。