[发明专利]降解莠去津的克雷白杆菌FH-1及含有该菌株的土壤生物修复菌剂

说明书

一种降解莠去津的克雷白杆菌FH‑1及含有该菌株的土壤生物修复菌剂，属于微生物技术领域。本发明所述菌株为革兰氏染色阴性菌，在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)的保藏号为CCTCC NO：M 2018334。本发明所述的克雷白杆菌FH‑1可以用于制备土壤生物修复菌剂。该莠去津降解菌为从多年施用莠去津的农田中通过富集培养分离得到的一株对莠去津具有较强降解能力的菌株，该菌株以莠去津为唯一氮源生长，在液体培养基中通过莠去津诱导增加菌体活性，提高对莠去津的降解能力。该菌剂的制备方法简单，成本较低，施用方便，可以撒施在土壤上，在土壤中的降解效果可达到73.2％，有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种降解莠去津的克雷白杆菌(Klebsiella SP.)FH-1及含有该菌株的土壤生物修复菌剂。

背景技术

莠去津(atrazine)化学名称为2-氯-4-二乙胺基-6-异丙胺基-1，3，5-三嗪，又名阿特拉津，是世界产量最大的除草剂。具有内吸选择性，根吸收为主，茎叶吸收很少。莠去津杀草谱较广，可防除多种一年生禾本科和阔叶杂草。适用于玉米、高粱、甘蔗、果树、苗圃、林地等旱田作物防除马唐、稗草、狗尾草、莎草、看麦娘、蓼、藜等杂草，对玉米有较好的选择性，对某些多年生杂草也有一定抑制作用。

莠去津易被雨水淋洗至土壤较深层，对某些深根草亦有效，但对敏感作物容易产生药害，持效期也较长。该药对人、畜毒性较强，在不少地方曾发生过中毒死亡事故。如果长期食入农药超标的水果和蔬菜，不但引起相应中毒症状，同时也影响免疫系统。当莠去津进入生物体内残留、富集到一定程度时就会产毒性。因此，研究解决莠去津残留毒害问题对扩大它在生产上应用，减少对后茬作物及环境造成的污染具有重要意义。

近年来，生物修复(Bioremediation)理论渐渐成为大家关注的焦点，生物修复技术因其操作简便、经济实用、环境友好等优点已成为处理环境中有机污染物的有效措施。目前大量研究证明利用微生物的代谢途径可以消除农药残留，其中投加高效降解菌株是生物修复中最常见最有效的一种方法。微生物降解农药残留依靠自然力量，不产生二次污染。通过筛选高效莠去津降解菌株，将其经过发酵加工成菌剂，应用于农药残留降解，从而达到消除土壤、水体、农产品中莠去津残留。

发明内容

本发明的目的是提供一种降解莠去津的克雷白杆菌(Klebsiella SP.)FH-1 及含有该菌株的土壤生物修复菌剂。

本发明所述的高效降解莠去津的克雷白杆菌(Klebsiella SP.)FH-1，于2018 年6月1日保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为中国武汉武汉大学(430072)，保藏编号为CCTCC NO：M 2018334，分类命名：克雷白杆菌属(Klebsiella sp.)FH-1。该菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

含有该克雷白杆菌(Klebsiella SP.)FH-1的土壤生物修复菌剂，是将克雷白杆菌FH-1的菌株作为活体成分制备获得，其步骤如下：

1)将克雷白杆菌FH-1的菌株于LB液体培养基中，30℃、150rpm下振荡培养至对数生长期，以pH为7.0的缓冲溶液清洗，获得菌种；所述LB培养基是将10g NaCl、5g酵母浸粉和10g胰蛋白胨，加入到1000mL蒸馏水配制而成，调节pH为7.0；

2)将步骤1)获得的菌种按体积比10％的接种量接种入种子瓶培养基， 25～30℃、150～200rpm下振荡培养至对数生长期，获得种子液；

3)将15～20mL步骤2)制备得到的种子液加入到1000g由豆粕、麦麸、木屑、稳定剂(硅藻土)组成的发酵培养基中，同时把15～20mL的营养液加入到上述1000g发酵培养基中，在25～30℃下进行通风发酵36～60h，并将发酵物在25～30℃下进行通风干燥，粉碎后进行包装，即得到本发明所述的降解菌 FH-1菌株的土壤生物修复菌剂；