[发明专利]一种镉离子人工抗原及其应用在审
申请号: | 201811505999.X | 申请日: | 2018-12-10 |
公开(公告)号: | CN110407928A | 公开(公告)日: | 2019-11-05 |
发明(设计)人: | 金仁耀;郭建军 | 申请(专利权)人: | 浙江工商大学 |
主分类号: | C07K14/765 | 分类号: | C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44 |
代理公司: | 杭州天昊专利代理事务所(特殊普通合伙) 33283 | 代理人: | 向庆宁;何碧珩 |
地址: | 310012 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 单克隆抗体 镉离子 杂交瘤细胞株 重金属镉 制备 离子 人工抗原 分泌 快速检测重金属 应用 残留检测 环境样品 抗镉离子 灵敏度 高地 | ||
1.一种镉离子人工抗原,其特征在于,该镉离子人工抗原由以下步骤制得:
称取5-8mg 2-S-(2-氨基苯)-1,4,7三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸(简写为o-NH2-Bn-NOTA),溶解于2mL 0.01mol·L-1、pH 7.4 4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES溶液,制得螯合剂溶液,此溶液为A液;
称取88.66mg硝酸镉溶解于5mL超纯水中,制得浓度为7.5×10-2mol·L-1的硝酸镉溶液,此溶液为B液;
将150~200μL的B液加入到A液中,室温下避光反应3~5h,此反应液为C液;
向C液中加入500~800μL,20mmol·L-1的戊二醛溶液,室温避光反应过夜,此反应液为D液;
称取20~30mg牛血清白蛋白BSA或鸡卵清蛋白OVA溶解于3mL HEPES,室温下磁力搅拌混匀,此反应液为E液;
将D液加入到E液中,室温下避光反应24h,后加入150~200μL硼氢化钠溶液(20mg硼氢化钠溶解于200μL超纯水中),室温下避光反应1h;
反应液先用8KD的透析袋透析3~5次,再用30KD的超滤离心管7000~9000r·min-1离心洗涤3~5次,每次15~20min,用5~10mL的0.01mol·L-1,pH 7.4的HEPES溶液复溶,后分装,-20℃低温保存,制得重金属镉人工抗原Cd-L1-BSA或者Cd-L1-OVA,L1表示2-S-(2-氨基苯)-1,4,7三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸;
合成路线为:
2.权利要求1所述的镉离子人工抗原在制备抗重金属镉离子单克隆抗体中的应用。
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