[发明专利]一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法

权利要求书

1.一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：将副干酪乳杆菌活化后进行扩大培养，待培养至指数中期时取菌液收集菌体，将收集的菌体重悬于与其等体积的培养基中制备成菌悬液，将菌悬液置于4℃~20℃下进行预处理2h，再置于37℃培养箱中培养至稳定期，离心去上清后重悬于1/10所述菌悬液体积的PBS溶液中，获得浓缩菌悬液，再用无菌生理盐水洗涤两遍后离心收集菌体，得到菌泥；所述预处理是在15℃下预处理2h；

步骤二：将菌泥与冻干保护剂混合；所述冻干保护剂由脱脂奶粉，蔗糖，聚乙烯吡咯烷酮，谷胱甘肽和水制备而成，调节冻干保护剂的pH至5.0~7.5；所述冻干保护剂与步骤一所述浓缩菌悬液的体积比为（1-3）：1；所述冻干保护剂中脱脂奶粉的质量浓度为10%-20%，蔗糖的质量浓度为10%-20%，聚乙烯吡咯烷酮的质量浓度为5%-9%，谷胱甘肽的质量浓度为0.7%-1.3%；

步骤三：将步骤二所得菌体和冻干保护剂的混合溶液平铺在冻干器皿中使其在冻干器皿中的厚度为0.3cm~0.7 cm，然后进行预冻处理，待冻结完全后将预冻好的样品进行真空冷冻干燥处理；所述预冻处理是在-196℃预冻处理15 min。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤二所述冻干保护剂中脱脂奶粉的质量浓度为15%，蔗糖的质量浓度为20%，聚乙烯吡咯烷酮的质量浓度为7%，谷胱甘肽的质量浓度为1.3%。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述冻干保护剂的制备方法为：将脱脂奶粉、蔗糖和聚乙烯吡咯烷酮溶解于一部分蒸馏水中，于100℃-115℃灭菌10min-20min，灭菌后冷却至室温，将谷胱甘肽溶解于另一部分蒸馏水中用0.22μm滤膜过滤，将所得两种溶液混合均匀，调节pH至5.0~7.5，获得冻干保护剂。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤二所述冻干保护剂与步骤一所述浓缩菌悬液的体积比为1.5：1。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤二调节冻干保护剂的pH至6.5。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤三中菌体和冻干保护剂的混合溶液在冻干器皿中的厚度为0.5cm。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤三所述的真空冷冻干燥条件为：冷阱温度为-55℃，真空度为0.160mbar~0.370 mbar，时间为12h~36 h。