[发明专利]一种核孔蛋白接枝均孔聚碳酸酯仿生蛋白传输膜的制备方法

说明书

本发明公开了一种核孔蛋白接枝均孔聚碳酸酯仿生蛋白传输膜的制备方法。该方法包括以下步骤：(1)采用等离子体辐照或过硫化物氧化使聚碳酸酯均孔膜表面羟基化；(2)表面羟基化的聚碳酸酯膜与二异氰酸酯反应使表面端羟基转变为异氰酸酯(‑NCO)基团；(3)经二异氰酸酯处理的膜再与二胺反应，使膜表面胺基化；(4)表面胺基化的膜与双功能蛋白交联剂4‑(p‑马来酰亚胺苯基)丁酸琥珀酰亚胺酯反应使膜表面具有高活性马来酰亚胺；(5)核孔蛋白(NSP1)末端的巯基(SH)与膜表面的马来酰亚胺键合将核孔蛋白接枝到聚碳酸酯均孔膜表面，制得核孔蛋白接枝均孔聚碳酸酯仿生膜，该仿生膜可用于选择性传输蛋白质。

技术领域

本发明涉及生物分离领域，具体地说是一种核孔蛋白接枝均孔聚碳酸酯仿生蛋白传输膜的制备方法。

背景技术

蛋白质药物是在蛋白质水平对疾病进行诊断、预防和治疗，广义的蛋白质药物包括所有化学本质为蛋白质或多肽的产品，如激素、生长因子/细胞因子、蛋白酶、受体分子、单克隆抗体及抗体相关分子、部分蛋白或多肽疫苗等。与以往小分子药物相比，蛋白质药物具有高活性、特异性强、低毒性、生物功能明确、有利于临床应用的特点。由于其成功率高、安全可靠，已成为医药产品中重要组成部分。然而，天然存在的蛋白质，或者通过发酵、培养或合成的蛋白质，在初始阶段总是由多种成分组成，须经分离和纯化后才能在医药、食品等领域中应用。因此，蛋白质的高效率和选择性分离研究具有重要的理论意义和实际应用价值，成为现代药物分析、生命科学、生物工程及至化学工程研究的热点。

目前用于蛋白质分离的手段主要是色谱，包括凝胶色谱、离子交换色谱、高效液相色谱等。然而这些技术所需的设备昂贵且处理量小，难以实现工业化生产应用。近年来，亲和色谱以其良好的分离性能被广泛应用于蛋白、核酸，多肽等生物大分子的分离纯化，该方法基于配基与目标生物分子间的相互识别作用，如抗体与抗原、糖与凝集素、酶与底物等，来达到分离目的，是目前大分子分离机制中最有效的手段之一，然而其操作易受传质限制、处理量少。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种核孔蛋白接枝均孔聚碳酸酯仿生蛋白传输膜的制备方法。

本发明所述的一种核孔蛋白接枝均孔聚碳酸酯仿生蛋白传输膜的制备方法，该方法包括以下步骤：(1)采用等离子体辐照或过硫化物氧化使聚碳酸酯均孔膜表面羟基化；(2)表面羟基化的聚碳酸酯膜与二异氰酸酯反应使表面端羟基转变为异氰酸酯-NCO基团；(3)经二异氰酸酯处理的膜再与弱碱性二胺反应，使膜表面胺基化；(4)表面胺基化的膜与双功能蛋白交联剂4-(p-马来酰亚胺苯基)丁酸琥珀酰亚胺酯反应使膜表面具有高活性马来酰亚胺；(5)核孔蛋白(NSP1)末端的巯基(SH)与膜表面的马来酰亚胺键合将核孔蛋白接枝到聚碳酸酯均孔膜表面，制得核孔蛋白接枝均孔聚碳酸酯仿生膜；其中，等离子体辐照的等离子源为氢气和氦气混合物，二者体积比0.5～2∶99，流量10～40L/min，功率为120～220W；过硫化物为过硫酸铵、过硫酸钾、过硫酸钠中的一种或任意比例的混合物；聚碳酸酯均孔膜的平均孔径范围为10nm～2000nm；二异氰酸酯包括1，6-己二异氰酸酯、甲苯2，6-二异氰酸酯、1，5-萘二异氰酸酯中的一种或任意比例的混合物；为避免聚碳酸酯膜溶解，需采用弱碱性二胺如对苯二胺或间苯二胺等对膜进行表面胺基化处理。采用上述方法制备的一种核孔蛋白接枝均孔聚碳酸酯仿生蛋白传输膜可以实现对核浆转运蛋白Kaps95的选择性运输。

附图说明

图1本发明实施例1中所用的蛋白质分离装置示意图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，其目的仅在于更好理解本发明的内容而非限制本发明的保护范围：

实施例1