[发明专利]一种水产品中孔雀石绿检测方法

权利要求书

1.一种水产品中孔雀石绿检测方法，其特征在于：所述水产品中孔雀石绿为基于磁性分子印迹聚合物和核酸适配体的四氧化三铁模拟酶催化而检测的水产品孔雀石绿，具体步骤如下：

(1)Fe₃O₄的合成：称取0.30～0.36g聚乙二醇，加入7～9mL超纯水，超声直至聚乙二醇完全溶解，称取2.00～2.06g FeCl₃加入到聚乙二醇溶液中超声溶解，再称取1.4～1.6g FeCl₂加入到上述溶液中至完全溶解，立即加入0.4～0.6mL 0.1mol·L^-1稀盐酸，通氮除氧12～18min，60℃水浴下边搅拌边迅速加入55～65mL氨水，调转速至1500r·min^-1，反应1h，用磁铁进行吸附，并用超纯水洗脱4～6次，真空冷冻干燥后保存备用；

(2)MG磁性分子印迹聚合物的制备：称取100～200mg Fe₃O₄加到30mL的pH值8.5的Tris-HCl缓冲液20mmol·L^-1中，再加入6mg MG和90mg盐酸多巴胺混匀，即MG浓度为0.2g·L^-1，多巴胺浓度为3g·L^-1，在电动搅拌下反应4h，用磁铁进行吸附，并用甲醇：乙酸为9:1(v/v)混合液洗脱至无MG模板洗出，再用甲醇洗至中性，最后用超纯水洗去甲醇，烘干后备用；

(3)Fe₃O₄模拟酶催化剂的制备：称取1.30～1.40g FeCl₃加到30～50mL乙二醇中搅拌溶解，再加入3.4～3.8g无水乙酸钠和800～1000μg PEG-200搅拌30min后转移到反应釜中，200℃下反应12h，冷却至室温后将反应物转移出反应釜，用超纯水和乙醇反复清洗，真空干燥备用；

(4)检测：称取10～20mg磁性分子印迹聚合物于10mL离心管中，加入3mL浓度为5～100nmol·L^-1的MG水溶液，吸附5min后用磁铁分离，弃去上清液，加入1mL甲醇乙酸(9:1，v/v)混合液洗脱15min，重复3次，合并提取液，用氮气吹干提取液，立即加入300μL醋酸钠缓冲液200mmol·L^-1(pH 4.0)，充分溶解后备用，在0.5mL离心管中加入10μL Fe₃O₄模拟酶催化剂和30μL 2.5μmol·L^-1MG-DNA核酸适配体，充分震荡混合30min后分别加入50μL一系列浓度的MG提取液，充分混合30min，最后加入80μL 1μmol·L^-13,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)溶液和80μL 1mol·L^-1H₂O₂溶液，震荡10min后用磁铁将Fe₃O₄模拟酶催化剂分离，上清液转入酶标板中，用酶标仪读取650nm处的吸光度值。