[发明专利]一种母乳多克隆抗体免疫亲和柱及其制备方法

说明书

本发明公开了一种母乳多克隆抗体免疫亲和柱及其制备方法，所述母乳多克隆抗体是以去除脂肪的母乳作为免疫原制备得到，以此母乳多克隆抗体与固相配体支持物制备亲和吸附剂，加入到层析柱中，经洗涤、封闭、平衡后制得母乳多克隆抗体免疫亲和柱。本发明制备方法简单，能够对母乳中丰度相对较低、在质谱中的信号较低的蛋白进行富集，有利于人类更加正确的认识母乳的蛋白轮廓，能应用于母乳蛋白质组学下游的相关技术方面，值得大面积推广和应用。

技术领域

本发明属于免疫亲和层析技术领域。更具体地，涉及一种母乳多克隆抗体免疫亲和柱及其制备方法。

背景技术

母乳作为婴儿理想的天然食物，除了蛋白质、脂肪、碳水化合物、矿物质、微量元素等，为婴儿生长发育提供能量与营养物质外，还含有丰富的生物活性物质，在增强婴儿抗感染能力、促进组织器官发育、建立自身免疫系统乃至调节婴儿社会行为等多方面发挥着重要的生物学功能。

通过母乳蛋白质组学的研究，揭示母乳中具有生物活性的蛋白质，对认识母乳中蛋白质的轮廓和完善婴儿奶粉的配方具有关键性意义。但是这些具有生物活性的蛋白质，其丰度相对较低，况且低丰度蛋白在质谱中的信号较低，不利于人类更加正确认识母乳的蛋白质轮廓。因此目前除去高丰度蛋白、富集低丰度蛋白是解决研究瓶颈的主要策略。

传统的蛋白质分离富集方法己经无法满足日益增长的技术需求，尤其体现在低丰度蛋白、糖基化后修饰蛋白和高分子量蛋白的分离分析方面。王静等的研究《利用免疫亲和层析技术去除母乳中高丰度蛋白的研究》中建立了一种去除母乳中高丰度蛋白的方法, 使低丰度蛋白得到富集，但是该研究制备的免疫亲和层析柱一定程度上能够去除母乳中的4种高丰度蛋白，洗脱效果分离效果较差。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有母乳中高丰度蛋白去除及低丰度蛋白富集技术的缺陷和不足，提供一种母乳多克隆抗体，并基于该抗体构建了免疫亲和柱，能够更有效地去除母乳中的高丰度蛋白，对母乳中丰度相对较低、在质谱中的信号较低的蛋白进行富集，有利于人类更加正确的认识母乳的蛋白轮廓，能应用于母乳蛋白质组学下游的相关技术方面。

本发明的目的是提供一种母乳多克隆抗体。

本发明另一目的是提供一种利用上述母乳多克隆抗体制备的免疫亲和柱。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明首先制备了一种母乳多克隆抗体，是以去除脂肪的母乳作为免疫原制备得到。优选免疫剂量1.25mg/只。

优选地，抗体溶液在被偏酸性的溶液洗脱后，立即用偏碱性的缓冲液中和，避免抗体在偏酸性的条件下失去活性。

优选地，所述偏酸性的溶液为pH 2.5-3.5的Glycine洗脱液。

更优选地，所述偏酸性的溶液为pH 3.0的Glycine洗脱液。

优选地，所述偏碱性的缓冲液为pH8-9的Tris-HCI。

更优选地，所述偏碱性的缓冲液为pH8.5的Tris-HCI。

优选地，纯化后的抗体0-8℃、3000-5000rpm超滤浓缩20-35min，使抗体的浓度提高。

更优选地，纯化后的抗体4℃、4000rpm超滤浓缩30min。

优选地，所得抗体经过Protein A/G agarose纯化。

具体地，所述多克隆抗体的制备方法如下：

S1. 母乳解冻后离心，避开上层乳清部分，吸取下层乳清部分；

S2. 初次免疫：母乳与弗氏佐剂乳化，乳化的标准是滴一滴液体在液面上，不散开证明乳化完成；