[发明专利]鉴定梯棱羊肚菌的特异性引物、试剂盒、方法及其应用

说明书

本发明提供了一种鉴定梯棱羊肚菌的特异性引物、试剂盒、方法及其应用。本发明提供的特异性引物对通过PCR技术可以快速、准确、灵敏地实现上述应用，且引物特异性强，PCR扩增反应时间短，引物的耐用性好。

技术领域

本发明属于生物学技术领域，具体涉及鉴定梯棱羊肚菌的特异性引物、试剂盒、方法及其应用。本发明技术适用于检测或辅助检测待测样品中是否含有或候选含有梯棱羊肚菌；鉴定或辅助鉴定待测样品是否为或候选为梯棱羊肚菌；鉴定或辅助鉴定市售梯棱羊肚菌的真伪性。

背景技术

羊肚菌(Morchella)隶属于真菌界，子囊菌亚门(Ascomycotina)，盘菌纲(Discomycetes)，盘菌目(Pezizales)，羊肚菌科(Morchellaceae)，是一种珍贵的食药用菌。羊肚菌的野生产量少，采集困难，栽培技术不成熟，价格昂贵，近年来研究人员大力发展羊肚菌的人工培植技术。据文献报道，羊肚菌属有三个支系、30个品种如尖顶羊肚菌、黑脉羊肚菌、六妹羊肚菌、梯棱羊肚菌等，外观及其相似，目前对其鉴别研究较少。仅有几篇文献使用真菌通用引物ITS扩增后测序比对确定品种，如王波等人,对人工栽培的梯纹羊肚菌进行了形态特征描述和ITS rDNA序列分析，建立发育树.(人工栽培羊肚菌的鉴定[J].西南农业学报,2013,26(5):1988-1991.)；陈吉岳等人对15个羊肚菌菌株和1个子实体对照进行了RAPD分析.(国产羊肚菌菌株的RAPD鉴别[J].植物分类与资源学报,2004,26(4):434-438.)。众所周知，采用ITS序列进行DNA测序来鉴别品种，时间比较长，且还需进行序列分析。目前未见报道通过羊肚菌特异性对羊肚菌物种进行鉴别。

发明内容

为弥补现有技术的空白，解决现有技术的缺陷，本发明提供了鉴定梯棱羊肚菌的特异性引物、试剂盒、方法及其应用。本发明首次对羊肚菌品种进行了特异性引物的设计，适用于检测或辅助检测待测样品中是否含有或候选含有梯棱羊肚菌；鉴定或辅助鉴定待测样品是否为或候选为梯棱羊肚菌；鉴定或辅助鉴定市售梯棱羊肚菌的真伪性。本发明提供的特异性引物对通过PCR技术可以快速、准确、灵敏地实现上述应用，且引物特异性强，PCR扩增反应时间短，引物的耐用性好。

具体的，

一方面，本发明提供了一种梯棱羊肚菌特异性引物，其序列如下：

MI-4F：5’-GTTATGATTCTGACGTCGGC-3’；

MI-4R：5’-CACCAGGGCTAGTAGCTTTAC-3’。

另一方面，本发明提供了一种鉴定梯棱羊肚菌的试剂盒，包含以下引物：

MI-4F：5’-GTTATGATTCTGACGTCGGC-3’；

MI-4R：5’-CACCAGGGCTAGTAGCTTTAC-3’。

另一方面，本发明提供了一种鉴定梯棱羊肚菌的方法，包括使用本发明所述的引物或本发明所述的试剂盒。

另一方面，本发明提供了一种鉴定梯棱羊肚菌的方法，包括步骤：

a)提取待测样品的基因组DNA；

b)利用本发明所述的梯棱羊肚菌特异性引物或本发明所述的鉴定梯棱羊肚菌的试剂盒对步骤a)中的基因组DNA进行PCR扩增，获得扩增产物；

c)利用步骤b)中获得的扩增产物鉴定所述待测样品。