[发明专利]一种用于乙型肝炎病毒基因分型检测的组合物、试剂盒及其方法

说明书

本发明公开一种用于乙型肝炎病毒基因分型检测的组合物、试剂盒及其方法。本发明的试剂盒中包含该组合物，组合物是由特定序列的引物组和探针组组成；本发明通过设计的引物组合探针组，对样本中的HBV DNA进行荧光实时定量PCR实现HBV的B、C、D三种基因分型检测。本发明的乙型肝炎病毒基因分型检测组合物和试剂盒操作简单、交叉反应少、成本低、灵敏度高、分型准确度高。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种用于乙型肝炎病毒基因分型检测的组合物、试剂盒及其方法。

背景技术

乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)作为一种累积感染全球20亿以上人口的病原体，严重危害着受感染人群的肝健康，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌(HCC)。HBV属嗜肝DNA病毒科(Hepandnaviridae)，其基因组为双链DNA，呈不完全闭合环状。依据HBV全基因序列核苷酸异源性≥8％，或S基因异源性≥4％这一原则，将HBV分为A～I型9种基因型。该9种不同的基因型在全球范围内呈差异性地域分布，在我国主要以B、C基因型及少量D基因型为主。

HBV研究的早期，主要采用血清亚型区分不同HBV毒株；随分子生物学研究的发展，相比血清亚型，HBV基因分型被发现能更准确地反映不同病毒株之间的异源性，且不同基因型的HBV的致病机理不同，导致不同基因型感染所致的乙型肝炎的病情进展、临床症状、预后、治疗方案及治疗效果都有所差异。例如，不同基因型HBV对病情进展和干扰素抗病毒治疗的效果不同，B基因型感染者比C基因型感染者更早出现HBeAg血清学转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌；而在HBeAg阳性患者中， B基因型感染者对干扰素抗病毒治疗的应答率高于C基因型感染者，A基因型感染者的应答率高于D基因型感染者。

HBV全基因组长约3.2Kb，对其全基因组进行测序是HBV基因分型的金标准，该方法结果可靠、直接，但耗时长，且费用偏高，不适宜广泛开展，故依据S基因核苷酸异源性≥4、同源性96％的标准对S基因测序结果进行分型演变为简化版本的HBV测序分基因型的方法，但费用高、费时的固有缺点仍然无法避免。其他临床上用于HBV基因分型的方法还包括限制性片段长度多态性分析(RFLP)、线性探针杂交检测、反向杂交法、基因芯片、荧光PCR等多种方法，其中荧光PCR法无需对扩增产物进行开盖处理，避免了诸多方法中杂交步骤所可能造成的污染的风险，且荧光PCR法可避免测序分型法对不同基因型混合感染漏检的情况。荧光PCR法虽简便快捷，但目前临床所用的荧光PCR分型检测产品通常需进行至少2管PCR检测才能区分3种或3种以上HBV基因型，又或者现有的乙肝病毒荧光PCR分型检测产品灵敏度不高、准确性差。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种用于乙型肝炎病毒基因分型检测的组合物、试剂盒及其方法。

一种用于乙型肝炎病毒基因分型检测的组合物，其特征在于：该组合物包括引物组和探针组；

所述引物组包括：

引物1：其具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，

引物2：其具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，

引物3：其具有如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，

引物4：其具有如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列，

引物5：其具有如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列，

引物6：其具有如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列；

所述探针组包括：

探针B：其具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，

探针C：其具有如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列，