[发明专利]一种用于定量检测尿液中PPi含量的比率型荧光探针的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于定量检测尿液中PPi含量的比率型荧光探针的制备方法。（1）以柠檬酸钠为碳源，谷胱甘肽为钝化剂，合成发射蓝色荧光的B‑CDs；（2）以1,2，4‑三氨基苯为碳源，甲酰胺为钝化剂，合成发射黄色荧光的Y‑CDs，并将其与合成的发射蓝色荧光的B‑CDs混合，形成在同一激发波长条件下可以同时发射蓝色荧光和黄色荧光的比率型荧光探针；（3）在探针中加入Fe³⁺，探针蓝色荧光被猝灭，黄色荧光保持不变；（4）加入PPi，结合探针中的Fe³⁺,蓝色荧光恢复，黄色荧光保持不变，通过检测蓝色荧光和黄色荧光的比值来定量检测PPi的浓度，灵敏简便，选择性好。

技术领域

本发明属纳米材料、荧光传感技术和生物分析检测领域，具体涉及基于碳点的比率荧光传感平台用于检测尿液中的PPi的方法。

背景技术

肾结石是一种当今社会的一种高发性疾病，其主要致病机制是尿道中的不溶性成分发生结晶反应，形成这种病理结晶的主要化学成分是草酸钙，磷酸钙和尿酸。焦磷酸盐(PPi,P₂O₄^7-)在体内是由三磷酸腺苷水解成腺苷一磷酸的过程中释放，是体内一些结晶反应例如磷酸钙的形成的抑制剂。研究表明，PPi可以作为肾结石形成的抑制剂，肾结石患者体内PPi的含量与结石的形成有关。因此，建立灵敏度高，选择性好，便于操作的用于检测尿液中PPi含量的方法具有重要的意义。

目前用于检测PPi的方法主要有色谱法和一些基于化学反应的酶催化反应的方法，但是这些方法都需要复杂的操作和昂贵的仪器，因此难以普及。近年来，一些荧光纳米材料逐渐被应用于PPi的检测，包括金纳米粒，石墨烯量子点等。但是这些已建立的方法通常都基于单个荧光信号的变化，非常容易受到外界条件的干扰。因此，建立比率型荧光探针，利用在同一激发波长下可以输出两个发射波长的特性可以克服上述缺点，改善探针的检测性能，具有重要的意义。

碳点(CDs)作为一种新型的荧光纳米材料，由于其制备前体丰富，良好的光稳定性，低细胞毒性和高生物相容性等，近在生物传感、生物成像、药物递送和光催化领域受到极大关注。近年来，CDs被广泛应用于检测金属离子，蛋白质和其他小分子。然而，这些检测方法大都完全依赖于单个荧光强度信号输出，其检测性能具有一定的局限性。据我们所知，目前还没有基于CDs的比率荧光探针用于PPi的检测。

发明内容

针对现有技术的问题，本发明的目的在于提供一种用于定量检测尿液中PPi含量的比率型荧光探针的制备方法，利用在同一激发波长条件下发射不同颜色荧光的两种CDs构建的比率荧光传感平台，可以大大降低来自光源、探针浓度和检测条件等因素的干扰，可以直接用于尿液中PPi的检测，灵敏度高。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种用于定量检测尿液中PPi含量的比率型荧光探针的制备方法，步骤如下：

(1)、合成发射蓝色荧光的B-CDs[Ma Y,Zhang Z,Xu Y,Ma M,Chen B,Wei L,etal.A bright carbon-dot-based fluorescent probe for selective and sensitivedetection of mercury ions.Talanta.2016；161:476-81.]：将柠檬酸钠和谷胱甘肽固体用水溶解，密封在反应釜中，高温高压条件下反应，得到的产物透析纯化得到发蓝色荧光的B-CDs，其发射波长为445-465nm；