[发明专利]一种猪肉中β受体激动剂快速检测的方法

说明书

本发明涉及一种猪肉中β受体激动剂快速检测的方法，包括：1)称取猪肉样品，进行匀浆、酶解后，加入提取液，旋涡振荡10‑15min，8000rpm离心5‑10min，得到上清液，备用；2)对MCX固相萃取柱进行预处理后，将步骤1)的上清液上样至MCX固相萃取柱，用去离子水冲洗并负压抽干MCX固相萃取柱，洗脱液过MCX固相萃取柱，浓缩干燥，用0.1％甲酸溶液定容，得到样品液；3)将样品液上样至超高效液相色谱仪，检测样品液β受体激动剂含量；本发明通过优化酶解条件，显著的缩短了酶解时间，再经过提取、洗脱可以快速的对猪肉样品进行前处理，用本方法的超高效液相色谱仪进行上样检测，可快速获得满意的分离效果，操作简便、快速、高效，适合大批量样品的检测。

技术领域

本发明涉及分析检测领域，特别涉及一种猪肉中β受体激动剂快速检测的方法。

背景技术

β-受体激动剂是一类化学合成的苯乙醇胺类物质，代表性化合物为妥布特罗、喷布特罗、克伦特罗、非诺特罗、西马特罗，早期主要用于防治人、动物支气管哮喘和支气管痉挛，后来发现在饲料中添加该类药物具有营养再分配作用，可明显提高动物的瘦肉率，因此曾被作为促生长添加剂被广泛关注。但是，人们食用了该类药物残留的畜禽产品会出现面色潮红、头痛、头晕、胸闷、心悸、四肢麻木等不良反应，严重的可危及生命。因此，美国、欧盟都先后立法禁止在养殖业中使用该类药物，我国政府也明令禁止其使用。目前β-受体激动剂的检测方法包括酶联免疫法，气质联用法，液质联用法等，在检测效率和成本上该方法有所欠缺，此类前处理过程的缺点是反复萃取损失大、处理过程耗时长、经济成本高、过程繁琐，不适合大批量样品的检测，因此，建立起一种简便、快速、高效的猪肉中β受体激动剂检测方法是非常必要的。

发明内容

本发明针对现有技术问题，提供一种猪肉中β受体激动剂快速检测的方法，通过优化酶解条件，显著的缩短了酶解时间，再经过提取、洗脱可以快速的对猪肉样品进行前处理，用本方法的超高效液相色谱仪进行上样检测，可快速获得满意的分离效果，操作简便、快速、高效，适合大批量样品的检测。

为实现以上目的，本发明采用的技术方案为一种猪肉中β受体激动剂快速检测的方法，包括以下步骤：

1)称取猪肉样品，进行匀浆、酶解后，加入提取液，旋涡振荡10-15min，8000rpm离心5-10min，得到上清液，备用；

2)对MCX固相萃取柱进行预处理后，将步骤1)的上清液上样至MCX固相萃取柱，用去离子水冲洗并负压抽干MCX固相萃取柱，洗脱液过MCX固相萃取柱，浓缩干燥，用0.1％甲酸溶液定容，得到样品液；

3)将样品液上样至超高效液相色谱仪，检测样品液β受体激动剂含量。

所述匀浆是向猪肉样品中加入pH值为5.0的0.2mol/L乙酸铵缓冲溶液，5000r/min匀浆1min，所述乙酸铵溶液与猪肉样品的质量比为4:1。

所述酶解是向匀浆后的猪肉样品中加入β-盐酸葡萄糖醛苷酶和芳基硫酸酯酶，35-39℃，酶解3-5h，每克所述猪肉样品中β-盐酸葡萄糖醛苷酶和芳基硫酸酯酶添加量为2500-3000U。

所述提取液是异丙醇和乙酸乙酯的混合液，所述异丙醇和乙酸乙酯的体积比为7:5，所述提取液与猪肉样品的质量比为10:1。

所述MCX固相萃取柱预处理是依次用10ml甲醇、10ml去离子水、10ml的0.1mol/L盐酸溶液平衡MCX固相萃取柱。

所述洗脱液为氨水和甲醇的混合液，所述氨水和甲醇的体积比为1:19，所述洗脱液与猪肉样品的质量比为2:1。

所述浓缩干燥是将洗脱液在50-55℃水浴中氮气吹至近干。

所述β受体激动剂包括妥布特罗、喷布特罗、克伦特罗、非诺特罗、西马特罗中的一种或多种。