[发明专利]一种靶向结合CD133蛋白的核酸适配体及其筛选方法和用途

说明书

本发明提供了一种靶向结合CD133蛋白的核酸适配体及其筛选方法和用途，核酸适配体序列如SEQ ID NO.1，本发明采用细胞筛选的方法从ssDNA文库中筛选出靶向结合CD133蛋白的适配体，并对筛选出的ssDNA通过高通量测序的方法进行检测，最终通过流式细胞术等方法对所得序列的稳定性以及亲和性的分析，挑选出适配体AP‑1‑M。然后通过免疫荧光法证明适配体AP‑1‑M能够特异性地靶向结合CD133蛋白，并和表达CD133蛋白的ATC细胞结合从而起到靶向输送的作用，为ATC的靶向治疗提供新的思路和方法。

技术领域

本发明属于生物制药领域，特别涉及一种靶向结合CD133蛋白的核酸适配体。

背景技术

甲状腺癌(thyroid carcinoma)是最常见的甲状腺恶性肿瘤，约占全身恶性肿瘤的1％。按照其恶性程度可分为分化型甲状腺癌(DTC)，低分化型甲状腺癌(PDTC)，未分化型甲状腺癌(ATC)。ATC由于能迅速扩展到颈部，会引起呼吸窘迫和食管梗阻，极易出现淋巴结和远处转移，其中位生存期少于6个月，甚至1年内的生存率只有10％。然而，目前人们对ATC的分子机制尚不明确，诊断和治疗方法有限，因此，迫切的需要更好的诊断和治疗的方法。

CD133蛋白为细胞膜蛋白超家族成员，含有865个氨基酸、分子量约为120kDa的糖蛋白，其分子结构包括：细胞外N-端，2个细胞外Loop环，5次跨膜结构域，一个59个氨基酸的细胞C-端和8个N-糖基化端。CD133蛋白的预测大小为97kDa，但实际的糖基化CD133的分子量为120kDa。近年来，研究者发现CD133蛋白存在于多种干细胞样的肿瘤细胞表面，其中包括肝癌、结肠癌以及卵巢癌。

核酸适配体，又称化学抗体，具有精准的靶向性，由单链的核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸构成。虽然多数核酸适配体本身没有治疗作用，但核酸适配体可以与毒性药物相连接组成靶向适配体偶联物，可以将药物“精确”地运送到靶细胞，使得适配体偶联药物被靶细胞内吞，在细胞内部释放药物诱导凋亡，既有效地提高了肿瘤局部的药物浓度，又可极大地降低体内其它组织、器官的毒性，从而达到真正靶向增效减毒的作用。

CD133蛋白存在于多种干细胞样的肿瘤细胞表面，其中包括肝癌、结肠癌以及卵巢癌，这为临床上筛选和研究新型药物提供了较好的特异性靶点，从而为研发更加安全有效的分子靶向药物提供了的思路。

此外，也有研究报道CD133蛋白在未分化型甲状腺癌(Anaplastic thyroidcarcinoma，ATC)中有表达，但是目前缺少合适的适配体用于未分化型甲状腺癌治疗研究。

发明内容

本发明的膜蛋白CD133为适配体，能够靶向结合。可以用于ATC的靶向治疗及研究。

本发明的目的是提供一种用于靶向结合CD133蛋白的单链DNA核酸适配体。

根据本发明的其中一方面，提供了一种靶向结合CD133蛋白的核酸适配体，该靶向结合CD133蛋白的核酸适配体为单链DNA核酸适配体。

根据本发明的其中一方面，提供了一种靶向结合CD133蛋白的核酸适配体，该靶向结合CD133蛋白的核酸适配体序列如序列表中SEQ ID NO.1

，其序列为：

5’-TACCAGCCGTTTCCCCGGAGGGTCACCCCTGACGCATTCGGTTGAC-3’。

根据本发明的其中一方面，提供了一种筛选靶向结合CD133蛋白的核酸适配体的方法，方法步骤为：

a、采用细胞筛选的方法从ssDNA文库中筛选出靶向结合CD133蛋白的适配体；

b、对步骤a筛选出的ssDNA通过高通量测序的方法进行检测，并对序列的稳定性以及亲和性的分析，筛选出靶向结合CD133蛋白的核酸适配体；