[发明专利]含单分子标签的测序接头和测序文库的构建方法

权利要求书

1.一种含单分子标签的测序接头，其特征在于：

通过第一核苷酸单链与第二核苷酸单链部分结合而形成，

其中，所述第一核苷酸单链包括单分子标签和第一测序引物序列，并且

所述第二核苷酸单链包括样本标签、以及与所述第一测序引物序列部分互补的第二测序引物序列。

2.如权利要求1所述的测序接头，其特征在于：

所述测序接头为Y字型接头。

3.如权利要求1所述的测序接头，其特征在于：

所述第一核苷酸单链还包括第一通用引物序列，并且

所述第二核苷酸单链还包括第二通用引物序列。

4.如权利要求1所述的测序接头，其特征在于：

所述单分子标签为用于标记不同DNA片段的随机的碱基序列。

5.如权利要求1所述的测序接头，其特征在于：

所述样本标签为用于区别不同样本的固定的碱基序列。

6.如权利要求1或4所述的测序接头，其特征在于：

所述单分子标签的序列为SEQ ID NO:5-10。

7.如权利要求1或5所述的测序接头，其特征在于：

所述样本标签的序列为SEQ ID NO:18-23。

8.如权利要求1所述的测序接头，其特征在于：

所述单分子标签的长度为4bp至20bp。

9.如权利要求1所述的测序接头，其特征在于：

所述样本标签的长度为4bp至20bp。

10.如权利要求1所述的测序接头，其特征在于：

所述第二核苷酸单链的5’端使用磷酸基团修饰。

11.如权利要求1所述的测序接头，其特征在于：

所述第一核苷酸单链与所述第二核苷酸单链通过退火而部分结合。

12.如权利要求1所述的测序接头，其特征在于：

所述第一核苷酸单链为5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACNNNNNNNNACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’，所述第二核苷酸单链为5’PHO-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTCTCGTGGGCTCGG；

在所述第一核苷酸单链中，所述第一测序引物序列为SEQ ID NO:1，所述第一通用引物序列为SEQ ID NO:2，其中，所述单分子标签为NNNNNNNN；

在所述第二核苷酸单链中，所述第二测序引物序列为SEQ ID NO:3，所述第二通用引物序列为SEQ ID NO:4，其中，所述样本标签为XXXXXXXX。

13.一种测序文库的构建方法，其特征在于：

包括：

(a)提取DNA；

(b)将DNA进行片段化处理；

(c)对所获得的DNA片段进行末端修复和加A尾；

(d)在步骤(c)所获得的DNA片段两端连接含有权利要求1-12中任一项所述的单分子标签的接头；

(e)以步骤(d)获得的DNA接头连接产物为模板，以两端接头的通用引物为正反向引物，进行PCR扩增并得到PCR产物；以及

(f)进行PCR产物纯化。

14.如权利要求11所述的测序文库的构建方法，其特征在于：

所述步骤(c)中，DNA片段的大小为100bp至250bp之间。

15.如权利要求11所述的测序文库的构建方法，其特征在于：

在步骤(f)中，利用磁珠法对所述PCR产物进行纯化。