[发明专利]一种制备右旋糖酐酶酶制剂的方法

说明书

本发明提供一种制备右旋糖酐酶酶制剂的方法，涉及酶制剂制备技术领域领域，该方法方法包括以下步骤：(1)菌种培养：配制种子液态培养基，将产生右旋糖酐酶的菌株接种到该液态培养基中恒温培养；(2)发酵培养：配制发酵培养基，接种菌种恒温发酵；(3)粗酶液分离和提纯得酶制剂；本发明能够制备出高活性右旋糖酐酶酶制剂，作为蔗糖生产工业添加剂，解决蔗糖生产工业所面临的的含有右旋糖酐的情况。

技术领域

本发明涉及酶制剂制备技术领域，具体涉及一种制备右旋糖酐酶酶制剂的方法。

背景技术

在蔗糖和白砂糖生产过程中，原料夹带的泥土即空气中细菌是糖汁中微生物主要来源。常见微生物主要由酵母、霉菌和细菌三类。部分微生物能够分泌出蔗糖转化酶，将蔗糖转化成糖酐，其中最严重的是肠膜明串珠菌，大量消耗蔗糖生成右旋糖酐。右旋糖酐是白砂糖酸性絮凝物的主要成分，右旋糖酐粘性高，糖液中含有右旋糖酐会增加糖液粘度，影响煮糖与分离过程，增加后期分离操作成本；同时，右旋糖酐在糖汁中的积累会混淆转光度，造成糖汁的纯度虚假上升，影响生产分析管理；此外，右旋糖酐使蔗糖结晶时生成异常形态的晶体，增加了制糖成本。右旋糖酐导致制糖工艺蔗糖的损失率高达0.07％，所以消除制备工艺中产生的右旋糖酐是制糖工业亟需解决的问题。

右旋糖酐酶属于糖酐水解酶，可以将右旋糖酐水解为低分子糖类，低分子糖类对制糖生产影响甚微。在西印度，添加3个酶活单位的右旋糖酐酶至100ml蔗汁中，在40℃下振荡反应20min，可除去68.5％的右旋糖酐，因此，右旋糖酐酶的加入能够改善蔗糖生产工艺。根据右旋糖酐的水解方式不同，将右旋糖酐酶分为内切右旋糖酐酶和外切右旋糖苷酶两种。外切右旋糖酐酶主要从右旋糖酐酶链的非还原端降解键，释放出葡萄糖。内切右旋糖酐酶主要水解右旋糖酐链内部的α(1-6)键，生成系列中低分子量多糖，大多数内切右旋糖苷酶只有在多个连贯的α-(1-6)葡萄糖苷键存在时才能发挥其催化作用，但也有不需要多个连贯的α-(1-6)葡萄糖苷键存在既能够发挥水解作用的内切右旋糖苷酶，例如Wynter等报道的一株厌氧嗜热细菌Rt364，它产生的右旋糖苷酶能水解淀粉中单一的α-(1-6)葡萄糖苷键。

由于右旋糖苷酶降解右旋糖酐的高效性，开发一种安全来源的右旋糖苷酶成为近年来的研究热点。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种制备右旋糖酐酶酶制剂的方法，制备出高活性右旋糖酐酶酶制剂，作为蔗糖生产工业添加剂。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种制备右旋糖酐酶酶制剂的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)菌种培养：配制种子液态培养基，具体操作为选取250g红薯，去皮洗净，切成1-3cm方块，加水1.5L，水开后继续煮沸30-45min，滤去红薯块，得到滤液补足至1.5L，向红薯滤液中添加碳源、氮源、铁源、磷源、镁源和钾源，调节初始pH值为5.0-6.0，然后将产生右旋糖酐酶的菌株接种到该液态培养基中，将接种后的液态培养基置于28℃恒温培养箱中培养20-30h；

(2)发酵培养：配制发酵培养基，具体操作如步骤(1)制备红薯滤液，加入氮源、碳源、磷源、铁源、镁源和钾源，将步骤(1)中制备的含有菌种的液态培养基混合液加入发酵培养基进行接种，接种量为发酵培养基液体体积分数的2-4％；调节初始pH值为5.0-6.0，然后置于28℃，转速为200r/min的恒温摇床中进行培养，培养时间为85-100h；

(3)粗酶液分离：将微生物发酵液采用转鼓式真空吸滤机离心分离，除去菌体，得到富含右旋糖酐酶的上清液作为粗酶液；