[发明专利]一种基于VEGFR-2抑制剂索拉菲尼的光亲合探针分子及其制备方法

说明书

一种基于VEGFR‑2抑制剂索拉菲尼的光亲合探针分子及其制备方法，索拉菲尼在NaOH碱性条件下酰胺键水解得到带有单羧酸的中间产物；含有光亲和基团双吖丙啶与炔基的链接体与带有单羧酸的中间产物在EDC·HCl的缩合作用下，得到基于VEGFR‑2抑制剂索拉菲尼的光亲和探针分子。本发明的索拉菲尼光亲和探针分子制备方法简单，易于实现，并且收率较高。本发明的索拉菲尼小分子光亲和探针能够用于确证索拉菲尼的作用靶标以及验证光亲和标记技术在确证小分子靶标方面的可行性。

技术领域

本发明涉及一种基于VEGFR-2抑制剂索拉菲尼的光亲合探针分子及其制备方法。

背景技术

光亲和标记技术(PAL)是结合现代分子生物学、细胞生物学、药物化学、分析化学等多学科的优势，运用合成的光亲和探针分子，在特定波长光的照射下产生高活性的中间体，其可以直接与药物分子特异性结合的蛋白质进行不可逆共价交联从而实现对药物靶标蛋白分子的捕获。它是分子水平上研究配体与受体相互作用的核心工具之一，对阐明配体与受体相互作用机理以及药物新靶点的发现都有着巨大的推动作用。

近些年来这项技术主要应用于药物分子靶标蛋白的确证，其主要基于光交联技术、生物正交技术以及相关的生物分析技术等，实现药物分子靶标的捕获及其确证。其中光亲和探针分子的设计合成是在不影响靶头药物活性的基础上直接进行结构修饰，分别引入光反应活性基团以及生物正交手柄设计合成光亲和探针分子，其在特定波长光的照射下特异性不可逆的共价捕获靶头化合物的靶标蛋白。再接下来通过生物正交反应来实现所捕获的靶标蛋白的识别确证。

血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor)是由VEGF基因表达的膜蛋白，属于酪氨酸家族蛋白，是与恶性肿瘤密切相关的大分子蛋白。血管内皮生长因子及其受体在一系列肿瘤细胞中都有过表达，该受体家族包括三个亚型：VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3。其中VEGFR-2主要参与血管内皮细胞的增殖，在癌细胞中分布也最广泛。一系列的研究证实它可以作为有效的药物靶标。

近五年以来，文献中所报道的光活性基团有芳基叠氮、二苯甲酮、含取代基的双吖丙啶、双吖丙啶这四大类。其中，光交联活性较好的是双吖丙啶。因此选择双吖丙啶作为光活性基团设计合成光亲和探针分子。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于VEGFR-2抑制剂索拉菲尼的光亲合探针分子及其制备方法，索拉菲尼光亲和探针分子用于确证索拉菲尼的靶标蛋白以及其与靶标蛋白的作用模式。并且可以用于验证光亲和标记技术在靶标蛋白确证方面的可行性。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种基于VEGFR-2抑制剂索拉菲尼光亲和探针分子，其结构式如下：

其中X＝O或NH。

一种基于VEGFR-2抑制剂索拉菲尼光亲和探针分子的制备方法，包括以下步骤：

1)索拉菲尼在NaOH碱性条件下酰胺键水解得到带有单羧酸的中间产物；

2)含有光亲和基团双吖丙啶与炔基的链接体与带有单羧酸的中间产物在EDC·HCl的缩合作用下，得到基于VEGFR-2抑制剂索拉菲尼的光亲和探针分子，结构式如下：

其中X＝O或NH。

本发明进一步的改进在于，所述步骤1)的具体过程为：将索拉菲尼、NaOH溶于无水乙醇中，80℃密闭条件下反应8h进行处理，得到带有单羧酸的中间产物。

本发明进一步的改进在于，将索拉菲尼0.2151mmol与NaOH 3.227mmol溶于3mL无水乙醇溶液中，N₂保护，80℃反应8h后进行处理，得到带有单羧酸的中间产物。