[发明专利]一种用于红汁乳菇鉴定的特异性DNA片段、扩增引物及红汁乳菇的鉴定方法

说明书

本发明提供了一种用于红汁乳菇鉴定的特异性DNA片段、扩增引物及红汁乳菇的鉴定方法，属于真菌物种鉴定技术领域。用于红汁乳菇鉴定的特异性DNA片段，具有如序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。用于扩增所述的特异性DNA片段的引物，包括Tb1引物和Tb2引物。红汁乳菇的鉴定方法，包括以下步骤：提取待检菌的基因组DNA；以基因组DNA为模板，用Tb1引物和Tb2引物进行PCR扩增；将扩增产物电泳；根据电泳图的条带判断是否为红汁乳菇；若电泳图中仅出现一条230bp大小的条带，则待检菌为红汁乳菇。所述方法能够实现从真菌中快速、准确地鉴定红汁乳菇。

技术领域

本发明属于真菌物种鉴定技术领域，具体涉及一种用于红汁乳菇鉴定的特异性DNA片段、扩增引物及红汁乳菇的鉴定方法。

背景技术

野生食用菌是一种重要的森林资源，在绿色食品开发、生物制药、环境保护等行业中发挥着重要的作用，特别是生长在林区的一些野生食用菌。红汁乳菇(Lactariushatsudake)，云南俗称铜绿菌、铜锣菌，是世界著名的美味野生食用菌，具有很高的经济价值，长期供不应求。该菌除鲜食外，还可加工成菌油，或经速冻后长期保，具有巨大的规模开发的市场前景。此菌试验抗癌，对小白鼠肉瘤的抑制率为100％，对艾氏癌的抑制率为90％，它与松等树木形成外生菌根。在这些野生食用菌的分类及其菌丝体分离物的鉴定方面，人们主要根据野生食用菌子实体的形态学、解剖学等特征来确定菌种。野生食用菌不产生子实体或尚未找到子实体时，就无法进行野生食用菌菌种的鉴定。即使是从野生食用菌的子实体上分离到纯菌种，为避免伴生菌和杂菌的污染所产生的误导，也应遵循柯赫法则进行回接试验，产生相同子实体的鉴定方法是令人信服的。遗憾的是现在很多珍贵的野生食用菌，尚未成功人工栽培出菇，在这种情况下就很难断定分离菌株的真伪。

红汁乳菇为乳菇属的野生食用菌，具有独特的口感。目前，真菌类采用DNA分子的方法鉴定一般使用ITS基因进行，但是由于近源种中存在保守序列，不能将目标菌与近源菌区分开，例如，红汁乳菇与红菇属中的青头菌用真菌ITS通用引物ITS4/ITS5扩增，无法鉴定红汁乳菇。目前使用的分子鉴定的DNA区段无法特异性鉴定红汁乳菇物种。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于红汁乳菇鉴定的特异性DNA片段、扩增引物及红汁乳菇的鉴定方法，能够从真菌中快速、准确地鉴定红汁乳菇。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种用于红汁乳菇鉴定的特异性DNA片段，所述特异性DNA片段具有如序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

本发明提供了一种用于扩增所述的特异性DNA片段的引物，包括Tb1引物和Tb2引物；

所述Tb1引物具有如序列表中SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；

所述Tb2引物具有如序列表中SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。

本发明提供了一种红汁乳菇的鉴定方法，包括以下步骤：

(1)提取待检菌的基因组DNA；

(2)以所述步骤(1)中提取的基因组DNA为模板，用上述方案中的引物进行PCR扩增，得到扩增产物；

(3)将所述步骤(2)中扩增产物电泳，得到电泳图；

(4)根据电泳图的条带判断是否为红汁乳菇；若电泳图中仅出现一条230bp大小的条带，说明待检菌为红汁乳菇。

优选的，所述PCR扩增的体系为PCR扩增MIX液22.5μl、所述Tb1引物1μl、所述Tb2引物1μl和DNA3μl。

优选的，所述PCR扩增的程序如下：98℃预变性2min；然后98℃变性20s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共35次循环；最后72℃延伸5min。