[发明专利]一种心肌肌钙蛋白I的荧光和比色双信号检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供一种心肌肌钙蛋白I荧光和比色检测试剂盒及检测方法，属于免疫分析领域。该试剂盒包括心肌肌钙蛋白I、cTnI捕获抗体、cTnI检测一抗、碱性磷酸酶标记的二抗、间羟基苯磷酸二钠盐、多巴胺。该试剂盒是通过在孔酶标板上依次吸附cTnI捕获抗体、cTnI和检测一抗形成类似三明治的结构，加入的碱性磷酸酶标记的二抗特异性地与检测一抗结合，最后加入底物间羟基苯磷酸二钠盐，在碱性磷酸酶的脱磷酸作用下生成间苯二酚，与多巴胺发生反应生成具有强紫外吸收和荧光发射的基团，进而实现对cTnI的定量检测。该试剂盒的检测结果与商品化的cTnI ELISA试剂盒的检测结果相符，可通过荧光激活和显色反应灵敏检测cTnI。

技术领域

本发明属于免疫分析领域，具体涉及一种心肌肌钙蛋白I的荧光和比色双信号检测试剂盒及检测方法。

背景技术

酶联免疫吸附分析(ELISA)基于抗原抗体特异性识别作用，并以酶作为信号输出单元而实现抗原高灵敏检测的技术，是生物样品分析中的一个重要的免疫方法。酶广泛地作为免疫分析中的标记物，基于酶高效的生物催化活性，一个酶分子可以在短时间内将大量的酶底物转化成产物，从而发挥信号放大的作用，这为分析物的灵敏检测奠定基础。碱性磷酸酶(ALP)是一种磷酸水解酶，该酶广泛分布于人体组织和体液。在碱性环境中，ALP能水解磷酸单酯化合物，切断底物分子中的磷酸酯键，从而脱掉底物中的磷酸基团。该酶的用途广泛，它可以作为某些疾病的标志物，包括骨病，糖尿病，乳腺癌和前列腺癌和肝炎。此外，ALP由于其较高的催化活性、较好的稳定性、易于和抗体偶联等特点，也经常作为ELISA的信号输出酶。

生物标志物可客观测定和评价普通生理、病理或治疗过程中的某种特征性，指示不同的疾病导致的致病过程，生物标志物的监测是基础和临床研究中的重要手段。检查一种疾病特异性的生物标志物，对于疾病的鉴定、早期诊断及预防、治疗过程中的监控可能起到重要作用。心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌梗死患者血清中的一个重要标志物，正常成年人血清中cTnI浓度通常低于0.2ng/mL，而心肌梗死爆发后，患者血清中cTnI含量在3-6小时内上升至50ng/mL，最后升至550ng/mL左右。因此，cTnI的准确定量对心肌梗死疾病的诊断和监控具有重大意义。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种心肌肌钙蛋白I荧光和比色双信号检测试剂盒及检测方法，该检测方法准确方便，具有普适性。

为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：

本发明首先提供一种心肌肌钙蛋白I的荧光和比色双信号检测试剂盒，包括：

心肌肌钙蛋白I(cTnI)、cTnI捕获抗体、cTnI检测一抗、碱性磷酸酶标记的二抗、包被缓冲液、洗涤液、抗体稀释液、样品稀释液、间羟基苯磷酸二钠盐(m-HPP)、多巴胺、封闭液、二乙醇胺(DEA)缓冲液和MgCl₂溶液。

在上述技术方案中，所述的包被缓冲液是pH＝8.0～9.6的10～100mM碳酸盐溶液。

在上述技术方案中，所述的洗涤液是pH＝7.4的含有0.01～0.5％Tween-20和10～100mM磷酸根/磷酸氢根/磷酸二氢根的混合溶液。

在上述技术方案中，所述的抗体稀释液是pH＝7.4的含有0.01～0.2％Tween-20和0.1-2％牛血清蛋白的缓冲溶液；所述的样品稀释液是含有0.1-2％牛血清蛋白的缓冲溶液。

在上述技术方案中，所述的封闭液是用抗体稀释液溶解的牛血清蛋白浓度为0.1～5％的溶液。

在上述技术方案中，所述的间羟基苯磷酸二钠盐(m-HPP)的浓度为50～500μM，多巴胺的浓度为20～200μM。

在上述技术方案中，所述的DEA缓冲液是浓度为10～200mM、pH 9.5～12.0的溶液，所述的MgCl₂溶液的浓度是0.25～5mM。