[发明专利]一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽及其制备方法

说明书

本发明公开了一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽及其制备方法，其以马氏珠母贝肉蛋白为原料，采用碱性蛋白酶进行酶解后，利用磁性限进亲和介质从马氏珠母贝肉蛋白的酶解产物超滤液中快速分离出具有ACE抑制活性的组分，并通过反相色谱柱进一步分离得到两个新的具有高ACE抑制活性的肽段，其氨基酸序列为His‑Leu‑His‑Thr或者为Gly‑Trp‑Ala，IC₅₀值分别为458.06±3.24μmol/L和109.25±1.45μmol/L。本发明制备ACE抑制肽的原料丰富，制备工艺合理、可操作性强，两个新的ACE抑制肽可以用于制备减缓高血压症状的功能食品。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽及其制备方法。

背景技术

高血压可导致许多严重疾病，包括心脏和血管疾病，肾脏疾病，动脉硬化和中风（世界卫生组织，2014年全球非传染性疾病报告）。血管紧张素转换酶（ACE）通过引起血管收缩而在血压升高中起关键作用。ACE抑制剂的使用通常被认为是降低血压并预防心血管疾病的有效解决方案。然而，化学合成的ACE抑制剂存在副作用，如引起咳嗽，皮疹，异常味觉等。与合成的ACE抑制剂相比，源自天然产物的ACE抑制肽稳定并且副作用最小，是重要的ACE抑制剂之一。ACE抑制肽来源于食物蛋白的酶解产物，如植物蛋白，鱼类，牛奶，贝类等。

马氏珠母贝，是世界上三大海产珍珠贝类之一。其肉质鲜美、蛋白含量高、脂肪低，营养价值丰富。近年来，由于珍珠养殖业的快速发展，其数量已相当可观。采珠后剩余的贝肉因为肉质口感的限制以及缺乏有效的加工手段，除少数用于加工鱼饲料和海产调味料外，大部分被作为饲料廉价出售，或当作生活废弃物进行处理，不仅造成了资源的浪费，而且也带来了严重的环境污染。因此，提高马氏珠母贝肉的附加值，提高其经济效益和资源利用率，具有重要意义。目前，有关马氏珠母贝肉高值化利用的研究还很少，可以将利用蛋白酶对马氏珠母贝肉进行酶解来获得ACE抑制肽作为提高马氏珠母贝肉综合利用效率的一个重要研究内容。

然而从酶解产物中分离ACE抑制肽存在分离效率低的瓶颈。传统的分离方法如超滤、微滤、盐析、透析、电泳等存在操作过程复杂、分离速度慢、样品处理量小、回收率低以及成本昂贵等问题。因此，如何快速、高效的从天然产物中分离纯化ACE抑制肽成为学者研究的重点内容。近年来，固定化金属亲和层析(IMAC)技术成为高效分离多肽的有力技术之一，许多有关IMAC分离多肽的研究已有报道。此外，IMAC也被用于分离蛋白质酶解产物中的ACE抑制肽，然而大多数报道的ACE抑制肽一般是具有2-12个氨基酸的小分子肽，并且在酶解产物中含量很低，酶解液中大量存在的大分子杂蛋白不仅会影响小分子肽的扩散，也会竞争IMAC的亲和吸附位点，大大降低目标肽的纯度及吸附量。同时近年来研究发现，限进介质(RAM)作为生物样品直接进行高通量分析的重要工具，其可以有效减少大分子的吸附，还可以特异性吸附小分子。这主要是基于其表面修饰的亲水性聚合物链如聚乙二醇或纤维素可以形成半透膜结构能有效地阻止介质表面上吸附大分子，而小分子则可以自由通过膜结构与亲和位点结合而被保留。

在本发明中，结合IMAC和RAM技术的优势制备了磁性限进亲和介质并用于快速从马氏珠母贝肉蛋白的酶解产物中分离ACE抑制肽，而且使用限进亲和介质分离ACE抑制肽具有效率高，成本低的特点。

发明内容

本发明为了解决现有技术的不足，提供了一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽及其制备方法，该方法利用制备的限进亲和介质快速从马氏珠母贝肉贝肉蛋白的酶解产物中快速分离ACE抑制肽，提高了ACE抑制肽的分离效率，并且获得对血管紧张素转化酶具有高抑制活性的ACE抑制肽。

本发明是采用如下技术方案实现的：

一种血管紧张素转化酶ACE抑制肽，其氨基酸序列为His-Leu-His-Thr或者为Gly-Trp-Ala。

上述的血管紧张素转化酶ACE抑制肽为从马氏珠母贝肉中提取获得。