[发明专利]一种利用水产品废弃物发酵制备生物表面活性剂的方法

权利要求书

1.一种利用水产品废弃物发酵制备生物表面活性剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)向鱼废中加入水得到水解混合液，在向水解混合液中加入水解蛋白酶得到反应液，并对反应液进行水解反应，水解完成后得到鱼废水解液，然后进入步骤(2)，其中：

鱼废与添加的水的质量比为1：(1～2)；

水解时间为2～6小时；

水解温度为45℃～65℃；

反应液的pH为4～8；

水解蛋白酶的添加量以水解混合液的质量计，添加量为10～40毫升/千克；

(2)将步骤(1)得到的鱼废水解液离心后提取上清液，然后将该上清液在-80℃下冷冻48～72小时后放入冷冻干燥机中,再次冷冻干燥48～72小时后得到鱼蛋白胨，完成后进入步骤(3)；

(3)配制种子培养基

向水中加入牛肉蛋白胨和NaCl，混合均匀后再在115～121℃，0.1～0.15MPa下灭菌40～50分钟,冷却后即得到种子培养基，该种子培养基的组成为：

牛肉蛋白胨15g/L；

NaCl 5g/L；

余量为水；

(4)配制发酵培养基

向水中加入NaCl、FeSO₄·7H₂O、KH₂PO₄、K₂HPO₄·3H₂O、MgSO₄·7H₂O、ZnSO₄、CaCl₂、CuSO₄、MnSO₄、步骤(2)得到的鱼蛋白胨、蔗糖，搅拌混合均匀后调节pH至7，然后再在115～121℃，0.1～0.15MPa下灭菌40～50分钟,冷却后即得到发酵培养基，该发酵培养基的组成为：

(5)发酵培养

取一枯草芽孢杆菌的单独菌落接种到步骤(3)获得的种子培养基中培养24小时，将该种子培养基以体积比2％的接种量接入步骤(4)得到的发酵培养基中，并置于温度为25～35℃，转速为150～200rpm的摇床中培养96～120小时，得到发酵液；

(6)提取生物表面活性剂

(61)将步骤(5)得到的发酵液于8000rpm离心15分钟后取上清液，向该上清液中加入HCl调节pH至2，然后将该上清液静置8～12小时后离心，取下层沉淀物质，然后进入步骤(62)；

(62)将步骤(61)得到的下层沉淀物质溶于甲醇中进行萃取，离心后收取上清液，重复萃取至少三次，合并上清液，其中：

甲醇的用量与下层沉淀物质的质量计，其用量为10mL/g；

(63)将步骤(62)合并后的上清液置于旋转蒸发仪中，以50～70rpm、35～40℃的条件下旋转蒸发去除有机溶剂，即得到生物表面活性剂。

2.根据权利要求1所述的一种利用水产品废弃物发酵制备生物表面活性剂的方法，其特征在于，在进行步骤(1)之前，还进行了预处理，将鱼废绞碎，并在4℃下冷冻保藏备用。

3.根据权利要求2所述的一种利用水产品废弃物发酵制备生物表面活性剂的方法，其特征在于，步骤(1)中的鱼废包括淡水鱼/海水鱼的鱼头和鱼内脏，其中鱼内脏包括鱼肝、鱼肺、鱼肠、鱼心。

4.根据权利要求3所述的一种利用水产品废弃物发酵制备生物表面活性剂的方法，其特征在于，步骤(1)中的鱼废为金枪鱼的鱼头和鱼内脏，其中鱼内脏包括鱼肝、鱼肺、鱼肠、鱼心。

5.根据权利要求1所述的一种利用水产品废弃物发酵制备生物表面活性剂的方法，其特征在于，步骤(1)水解蛋白酶为肉类水解蛋白酶，包括内切蛋白酶和外切蛋白酶。

6.根据权利要求1所述的一种利用水产品废弃物发酵制备生物表面活性剂的方法，其特征在于，步骤(1)的水解反应的优选条件为：

鱼废与水的体积比为1：1；

水解时间为4小时；

水解温度为55℃；

反应液的pH为7.6；

水解蛋白酶的添加量以水解混合液的质量计，添加量为30毫升/千克。