[发明专利]一种杂多糖PEP及其应用

说明书

本发明公开了一种杂多糖PEP及其应用，其来源于南极海洋细菌发酵液的分离纯化，安全经济且成本低廉，相比传统多糖有来源不受季节气温产地限制，生产周期短，节约资源等优点，能够通过线粒体通路和内质网通路这两条通路诱导WEHI‑3细胞凋亡，令其具有优良的免疫和抗肿瘤活性，可为多糖药物开发提供重要的技术支持和研究方向。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及一种杂多糖PEP及其应用。

背景技术

当今社会，肿瘤的发病率呈上升趋势且发病群体年轻化。在过去的几十年里，肿瘤是仅次于心脑血管疾病导致死亡的第二大病症，已然成为威胁当今社会人类健康的重大疾病。白血病，是血液系统里异常的原始造血干细胞失去了分化成熟的能力而停留在细胞发育的不同阶段的克隆性恶性肿瘤。临床表现为发热、严重贫血、淋巴结肿大及出血，严重时会导致急性死亡，是一类危害人类健康的重要的恶性肿瘤。

现阶段，各国的科研人员都试图从白血病的病因，发病机理及治疗等方面找到突破，临床上治疗手段主要还是手术治疗，放射性治疗和化学药物治疗这三大治疗手段。这三大治疗手段都有其治疗局限性，人们迫切需要找到一种毒副作用小，普适性强，能有效控制和杀死恶性肿瘤的药物或者辅助治疗药物，以改善现有的治疗方法与策略。新的治疗策略不仅要提高治愈率，更要着重提高患者的生活质量。

多糖（polysaccharide）是一类具有天然生物活性的聚合物，由10个及以上单糖连接而成具有多羟基的醛或酮类的化合物，多糖不仅是提供能量和组成结构的物质，还具有抗氧化，清除自由基的功能，多糖在抗肿瘤领域的研究是从上个世纪50年代末日本科学家发现香菇多糖后开始兴起的。微生物多糖相比动植物多糖有来源不受季节气温产地限制，生产周期短，节约资源等优点。发展前景广阔，受到科学家的青睐，在医药食品行业的应用逐渐扩大。因此，从可发酵微生物中寻找高活性的多糖是多糖药物开发的重要方向。

南极特殊的极地气候造就了其微生物拥有着不同于陆生微生物的特殊的生理生化特性。这些生物能够在极端温度和盐度的严酷条件下生存。许多南极细菌可以产生大量胞外聚合物，经研究发现这些胞外聚合物可以被微生物利用来创造和维持一个具有保护作用的微环境。但是，这些胞外聚合物具有的生物活性潜力却还很少被研究。

发明内容

本发明针对现有技术中的不足，提供一种杂多糖PEP及其应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种杂多糖PEP，由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，分子量为397kDa。

所述杂多糖PEP由南极海洋细菌Pseudoaltermonas sp.S-5的发酵液中分离纯化得到。

所述杂多糖PEP的提取方法包括以下步骤：

将南极海洋适冷菌Pseudoaltermonas sp.S-5的种子液接种于2216E培养基中，培养结束后取发酵液浓缩后静置过夜，离心，收集沉淀，再将沉淀溶于蒸馏水中，离心取上清，将上清用Sevag法脱蛋白，旋转蒸发除去有机试剂，并经过D301R阴离子交换树脂脱色，收集洗脱液，透析，将得到的溶液冷冻干燥得到胞外粗多糖样品，将该粗多糖溶于Tris-HCl缓冲液中，离心，经DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱、SephadexG-75葡聚糖凝胶柱纯化得到杂多糖PEP。

所述杂多糖PEP的提取方法包括以下更具体的步骤：