[发明专利]一种磁性DNA水凝胶封装双酶的方法有效
| 申请号： | 201811463261.1 | 申请日： | 2018-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN109576256B | 公开（公告）日： | 2022-05-13 |
| 发明（设计）人： | 杨屹;宋佳一;苏萍 | 申请（专利权）人： | 北京化工大学 |
| 主分类号： | C12N11/18 | 分类号： | C12N11/18;C12N11/14;C12N11/10;C12N11/02 |
| 代理公司： | 北京思海天达知识产权代理有限公司 11203 | 代理人： | 刘萍 |
| 地址： | 100029 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 磁性 dna 凝胶 封装 方法 | ||
1.一种磁性DNA水凝胶封装双酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将生物素功能化修饰的单链DNA ssDNA1与未修饰的单链DNA ssDNA2溶于缓冲溶液中，混合溶液在95°C反应5 min，反应后的混合溶液室温冷却4 h制备长链DNA超分子结构；生物素与ssDNA1的摩尔比为1:1；ssDNA1和ssDNA2摩尔比为1:1；ssDNA1和ssDNA2为首尾交相互补配对构成DNA超分子结构；
（2）将（1）中合成的DNA超分子结构与磁性纳米粒子、葡萄糖氧化酶及辣根过氧化物酶混合30 min，混合液中加入链霉亲和素反应24 h，合成磁性DNA水凝胶封装双酶体系；辣根过氧化物酶和葡萄糖氧化酶摩尔比为2:1，链霉亲和素和生物素的摩尔比为1:2；
步骤(1)中所述的ssDNA1的序列为5′-CGTCCTACACTCCTGGCAGTCTCGTTCTAGTCTCGCGTTGCACCTCCGTCATGATCCATTCTCCACCTCG-biotin-3′，ssDNA2的序列为5′-CGAGACTAGAACGAGACTGCCAGGAGTGTAGGACGCGAGGTGGAGAATGGATCATGACGGAGGTGCAACG-3′；
步骤(2)中所述的磁性纳米粒子为四氧化三铁纳米粒子。
2.根据权利要求1所述的磁性DNA水凝胶封装双酶的方法，其特征在于：步骤（1）中ssDNA1和ssDNA2浓度均为50 μM。
3.根据权利要求1所述的磁性DNA水凝胶封装双酶的方法，其特征在于：步骤(1)中生物素均匀分布在长链DNA超分子结构中。
4.根据权利要求1所述的磁性DNA水凝胶封装双酶的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液，pH 7.4，0.1 M NaCl。
5.根据权利要求1所述的磁性DNA水凝胶封装双酶的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的辣根过氧化物酶和葡萄糖氧化酶的浓度分别为2 mM和1 mM。
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