[发明专利]一种DNA大片段筛选回收试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种DNA大片段筛选回收试剂盒，包括试剂盒A和试剂盒B，其特征在于：所述试剂盒A电泳液成分Tris 1240g，TAPS 1401.6g，EDTA 0.48g，seakem GOLD Agarose 75g；所述试剂盒B的成分DNA洗脱液NaI 40ml，醋酸钠400ul，磁珠100μl。

2.根据权利要求1所述的一种DNA大片段筛选回收试剂盒，其特征在于：所述试剂盒A共10次反应，SYBR为5u；所述试剂盒B共10次反应，SYBR为50ul。

3.一种根据权利要求1-2任意一项所述的DNA大片段筛选回收试剂盒的使用方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：将有机玻璃的电泳凝胶床洗净，晾干，用胶带将两端的开口封好，放在水平的工作台上，插上样品梳；

S2：每次取Tris 124g,TAPS 140.16g，EDTA 0.48g，加1L的dH2O室温放置备用；

S3：琼脂糖凝胶的制备，称取琼脂糖放置，再取步骤2中液体中溶解，置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化，取出摇匀；

S4：取步骤2中液体50ml,seakem GOLD Agarose 75g，在950ml的dH2O内溶解；

S5：将冷却到60℃的seakem GOLD Agarose溶液轻轻倒入电泳槽水平板上；

S6：待seakem GOLD Agarose胶凝固后，在电泳槽内加入步骤2中溶液，然后拔出梳子；

S7：将DNA样品用微量移液器将混合液加到样品槽中，每槽加10-20μl，记录样品的点样次序和加样量；

S8：安装好电极导线，点样孔一端接负极，另一端接正极，打开电源，调电压至75V，电脉冲16h-20h，达到时间后停止电脉冲；

S9：加入SYBR 5ul到显影液中，放入凝胶遮光盖住，放置30分钟；

S10：取出凝胶在蓝光凝胶成像仪下快速切下所需要的片段琼脂糖胶块，加入400ul的NaI溶液，水浴10min；

S11：向步骤S10溶液中加入40ul的2.5mol/L醋酸钠和400ul无水乙醇，在-20℃条件下放置15-30min，在转速为10000rpm条件下离心10min；

S12：沉淀用70％酒精洗涤两次后再次倒入70％乙醇，液体中放置磁珠10ul静置2min，轻微搅拌1次，循环后去除磁珠，留取液体；

S13：沉淀用70％酒精洗涤1次，风干后加入dd H2O，并在2-8℃条件下放置。

4.根据权利要求1所述的一种DNA大片段筛选回收试剂盒的使用方法，其特征在于：所述步骤S3中制备的琼脂糖凝胶量为110ml。

5.根据权利要求1所述的一种DNA大片段筛选回收试剂盒的使用方法，其特征在于：所述步骤S8中电脉冲采用型号为Part No.PPI0200。

6.根据权利要求1所述的一种DNA大片段筛选回收试剂盒的使用方法，其特征在于：所述步骤S10中加入的NaI溶液的浓度为6mol/L。

7.根据权利要求1所述的一种DNA大片段筛选回收试剂盒的使用方法，其特征在于：所述步骤S10中的水浴温度条件为50-60℃。

8.根据权利要求1所述的一种DNA大片段筛选回收试剂盒的使用方法，其特征在于：所述步骤S12的循环次数为2次。