[发明专利]一种多肉植物红蛋水泡的组织培养方法

权利要求书

1.一种多肉植物红蛋水泡的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)以红蛋水泡的叶片为外植体，消毒，得到表面消毒的外植体；

2)在所述表面消毒的外植体的伤口处用羧苄青霉素粉处理，接种于愈伤组织诱导培养基中，在接种后的外植体的表面撒羧苄青霉素粉，21～25℃下愈伤组织诱导培养，得到愈伤组织；

所述愈伤组织诱导培养基以MS为基本培养基，还包括以下浓度的组分：1～1.5mg/L 6-苄基腺嘌呤、0.2～0.5mg/L吲哚乙酸、20～30g/L食用白砂糖和6.5～8g/L琼脂粉，pH值为5.8～6.0；

3)将愈伤组织转接到绿色球形颗粒诱导培养基上，21～25℃下进行 绿色球形颗粒诱导培养，得到绿色球形颗粒；

所述绿色球形颗粒诱导培养基以MS为基本培养基，还包括以下浓度的组分：0.5～1.5mg/L玉米素、0.5mg/L IAA、20～30g/L食用白砂糖和6.5～8g/L琼脂粉，pH值为5.8～6.0；

4)将所述绿色球形颗粒接种于硬化培养基上进行硬化培养，得到分化芽苗；

所述硬化培养基包括花宝二号硬化培养基或1/2WPM改良培养基；

所述花宝二号硬化培养基包括以下浓度的组分：0.5g/L花宝二号、0.5mg/L玉米素、0.5mg/L IAA、30g/L食用白砂糖和6.5～8g/L琼脂粉；pH值为5.8～6.0；

所述1/2WPM改良培养基以不含硝酸钙的1/2WPM培养基为基础培养基，包括以下浓度的组分：0.5mg/L玉米素、0.5mg/L IAA、30g/L食用白砂糖和6.5～8g/L琼脂粉；pH值为5.8～6.0；

5)将分化芽苗进行壮苗培养和驯化培养，得到红蛋水泡成苗；

所述愈伤组织诱导培养、绿色球形颗粒诱导培养或硬化培养期间进行光照；所述光照的时间为14～17h/d；所述光照的强度为3000～5000Lx；

所述壮苗培养用培养基以1/2N6或1/2B5培养基为基本培养基，包括0.2mg/L IAA、30g/L食用白砂糖和6.5～8g/L琼脂粉；pH值为5.8～6.0；

所述壮苗培养期间进行光照，所述壮苗培养期间的光照的时间为16h/d，强度为4000Lx；所述壮苗培养的温度为23℃。

2.根据权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，步骤3)中所述绿色球形颗粒诱导培养基包括以下浓度的组分：1.0mg/L玉米素、0.5mg/L IAA、30g/L食用白砂糖和7g/L琼脂粉。

3.根据权利要求1或2所述的组织培养方法，其特征在于，在所述转接到绿色球形颗粒诱导培养基上前，包括将所述愈伤组织切成愈伤组织小块；所述愈伤组织小块的体积为0.3～0.5×0.3～0.5×0.3～0.5cm³。

4.根据权利要求3所述的组织培养方法，其特征在于，步骤3)中每个培养皿中接种有8～10个所述愈伤组织小块。

5.根据权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，步骤2)中所述愈伤组织诱导培养基包括以下浓度的组分：1.5mg/L 6-苄基腺嘌呤、0.5mg/L吲哚乙酸、30g/L食用白砂糖和7g/L琼脂粉。

6.根据权利要求1或5所述的组织培养方法，其特征在于，步骤2)中每瓶愈伤组织诱导培养基中接种3～5个红蛋水泡叶片。

7.根据权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，步骤4)中每瓶硬化培养基上接种有15～20颗绿色球形颗粒。

8.根据权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养、绿色球形颗粒诱导培养或硬化培养期间进行光照的时间为16h/d，强度为4000Lx。

9.根据权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于，步骤5)中所述驯化培养用基质包括体积比为2～3：1～1.5：1～1.5的泥炭土、珍珠岩和粗河沙的混合物。