[发明专利]一种高温-变温处理获得甘薯脱毒苗的方法

说明书

本发明公开了一种高温‑变温处理获得甘薯脱毒苗的方法，属于脱毒甘薯苗培育技术领域。本发明的高温‑变温处理获得甘薯脱毒苗的方法是对生根后的甘薯幼苗，进行每天40‑45℃高温处理5h，之后28℃处理的高温‑变温处理，连续处理30‑40d；本发明高温‑变温处理获得脱毒甘薯苗的方法对病毒的钝化效果好，剥离的茎尖长度大，容易剥取，效率高，不定芽生长快；再生苗的生根质量好、苗粗壮、成活率高。

技术领域

本发明属于脱毒甘薯苗培育技术领域，具体涉及一种高温-变温处理获得甘薯脱毒苗的方法。

背景技术

甘薯是重要的粮食、饲料和工业原料加工作物，在农业和国民经济中占有重要地位。甘薯营养丰富，随着人们保健意识的提高，近年来也越来越受到人们的青睐。甘薯属于块根作物，生产过程中利用营养体进行繁殖，因此容易受到病毒的侵染，并且随着育成品种栽培年限的延长，病毒密度会越来越高。目前已报道侵染甘薯的病毒有20余种。我国发生的主要有甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)、甘薯潜隐病毒(SPLV)、甘薯脉花叶病毒(SPVMV)、甘薯轻斑驳花叶病毒(SPMMV)、甘薯卷叶病毒(SPLCV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草花叶病毒(TMV)，发病较重的是SPFMV、SPLV、SPLCV等。甘薯病毒可通过块根、昆虫介体、嫁接及机械传播。病毒的侵染能导致植株幼苗长势弱、返苗慢、结块少、薯块小、薯皮色浅且不光滑及薯块褐裂等，使产量下降，品质变劣，甚至失去商品价值。尤其近年来病毒病害影响我国甘薯生产，并且有越演越烈的趋势，严重时可造成90％以上的产量损失，甚至绝收。目前，在我国广东、江苏、四川、安徽、福建和山东等地均已有SPVD发生。

克服病毒病危害的主要方法是利用茎尖培养生产脱毒苗，因为病毒在植物体内的分布是不均匀的，离分生组织越远病毒密度越高，反之越低，而分生组织一般没有病毒。但只剥取茎尖分生组织进行培养往往不易成活。因此，一般剥取带有1-2个叶原基的茎尖进行培养，但这又降低了脱毒效果。克服两者的矛盾，既提高再生率又提高脱毒率成为甘薯脱毒苗生产的瓶颈。

利用甘薯茎尖培养生产脱毒苗已有研究和报道，但以往多用大田或温室栽培的茎蔓上取材料剥取茎尖；还有用薯块取材料剥取茎尖培养的，但也是正常温度条件下催芽。选用上述这些方法，在常规条件下生长和培养，因供脱毒的材料生长较慢，代谢不强，剥取茎尖培养脱毒效果差，茎尖不易剥取，并且再生率低。另外，对于一些病毒病严重的老品种，常规脱毒方法的脱毒效果也不太理想。

此外，现有甘薯驯化移栽之前幼苗在固体MS培养基生长，但移栽时培养基难以清洗，且易感染细菌。移栽时易伤根，脱毒苗缓苗慢。

发明内容

针对现有脱毒技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种高温-变温处理获得甘薯脱毒苗的方法。

为了达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种高温-变温处理获得甘薯脱毒苗的方法，步骤如下：

(1)选取无虫蛀无损伤的甘薯薯块，太阳底下暴晒2-3d；

(2)将薯块用清水洗净，薯块上覆盖沙子，放入培养箱中28℃进行催芽；

(3)当芽苗长至10cm以上，取幼苗顶端2-3cm长(带幼叶)，剪去肉眼可见的叶片，先用清水冲洗，然后进行表面消毒，消毒后插入MS培养基中培养；

(4)幼苗生根后，在培养箱中进行每天40-45℃高温处理5h，之后28℃处理的高温-变温处理，连续处理30-40d；

(5)在体视解剖镜下剥取带叶原基长度为0.5-0.8mm的茎尖，接种到添加0.1-0.2mg/LNAA和1.0-2.0mg/L BAP的MS培养基上，培养温度为25-27℃，每日13小时光照，2000-3000lx，培养3-4周，诱导不定芽的分化；

(6)当再生小苗长至2cm以上时，从基部切下，转移至不添加激素的培养基中得完整脱毒苗；