[发明专利]一种甘蔗组培苗种源的低温保存方法以及培育方法

权利要求书

1.一种甘蔗组培苗种源的低温保存方法，其特征在于，包括以下步骤：丛生芽切割后在海藻酸钠溶液中浸泡，然后将丛生芽块，放入氯化钙溶液中，利用海藻酸钠与氯化钙反应生成的凝胶类物质包埋丛生芽块；

包埋的丛生芽块进行低温保存即可；

所述海藻酸钠溶液的质量浓度为4%±0.5%；

丛生芽切割后在海藻酸钠溶液中浸泡2~3min；

所述氯化钙溶液的质量浓度为2.5%±0.5%；

所述低温保存的培养温度为14~18℃，培养光照为800-1000 lx，光照时间10-12小时；

所述低温保存的培养基以1/2 MS为溶剂，含有以下组分：6-苄氨基腺嘌呤0.20~0.80mg /L，多效唑0.02~0.1mg /L，蔗糖 10~20 g /L，琼脂6~7g /L，pH为 5.8~6.2。

2.根据权利要求1所述的甘蔗组培苗种源的低温保存方法，其特征在于，凝胶类物质包埋丛生芽块后用无菌水冲洗3~4次，置于无菌纸上吸去表面水分，再进行低温保存。

3.根据权利要求1或2所述的甘蔗组培苗种源的低温保存方法，其特征在于，所述丛生芽采用以下方法制备：选取生长健壮、无病害的甘蔗植株，选取幼嫩生长力强的茎芽，切段留存单芽5~7厘米，用水清洗后，于52±2℃水浴2小时，取出后，32±2℃培养10~14天，选取健壮的幼芽，在无菌条件下，将外植体消毒后剥至生长点，进行丛生芽增殖。

4.根据权利要求3所述的甘蔗组培苗种源的低温保存方法，其特征在于，所述丛生芽增殖的培养条件：温度28~31℃，光照强度1800~2100 lx，光照时间15-17小时/天；

接种到腋芽启动培养基中进行丛生芽增殖，所述腋芽启动培养基以MS培养液为溶剂，含有以下组分：6-苄氨基腺嘌呤1.0~2.0 mg/L、吲哚丁酸 0.2~0.6 mg/L、蔗糖20~30 g/L、琼脂 5.5 ~ 7 g /L，pH为 5.8~6.2。

5.根据权利要求4所述的甘蔗组培苗种源的低温保存方法，其特征在于，所述腋芽启动培养基上进行丛生芽增殖到第2~3代时，每个外植体有3~5个芽，取样3~4个进行“花叶病”的病毒免疫学检测，检测无病菌的株系用于种源低温保存。

6.一种甘蔗组培苗种源的培育方法，其特征在于，权利要求1-5任一项所述的甘蔗组培苗种源的低温保存方法得到的甘蔗组培苗种源转接到恢复生长培养基中培养15~20天时，将恢复生长的包埋体接种到新的恢复生长培养基中进行增殖快繁，获得丛生芽；

所述恢复生长培养基中的培养条件：温度26~31℃，光照强度1800~2100 lx，光照时间15-17小时/天；

所述恢复生长培养基以MS培养液为溶剂，含有以下组分： 6-苄氨基腺嘌呤1.0~2.0 mg/L、吲哚丁酸 0.2~0.6 mg /L、蔗糖20~30 g /L、琼脂 5.5 ~ 7 g /L， pH为 5.8~6.2；

所述丛生芽经生根培养得到试管苗，所述生根培养步骤为：获得的丛生芽切成带有2~3个芽的丛生芽，转入生根培养基中生根培养，培养温度28~31℃，光照度1800~2100 lx ，光照时间15-17小时/天，直至长成试管苗。