[发明专利]一种用于识别或富集有核红细胞的方法

说明书

本发明提供了一种用于识别或富集有核红细胞的方法。利用特定的核酸适体与外周血中的有核红细胞的特异性来识别或富集有核红细胞。与现有技术相比，本发明提供的方法具有显著优点，主要表现在：(1)提供了一种新的有核红细胞的捕获或富集方法，具有重要意义；(2)利用核酸适体对有核红细胞进行特异性识别或捕获，可以有效提高目标细胞的识别或捕获效率，对于有核红细胞的相关研究有重要意义；(3)核酸适体分子量小，制备方法是化学合成，具有易修饰、稳定性强、便于保存等优势。(4)核酸适体在识别过程中对有核红细胞的特异性好，亲和力好，操作简单，准确性和灵敏度高。为疾病筛查或者胎儿产前诊断提供了新的方法和途径。

技术领域

本发明属于有核红细胞检测技术领域，具体涉及一种用于识别或富集有核红细胞的方法。

背景技术

有核红细胞在正常成人外周血中不能见到，在出生1周之内的新生儿外周血中可见到少量。成人外周血中出现有核红细胞均属病理现象。可见于：①增生性贫血：最常见于各种贫血，急性失血性贫血、巨幼红细胞性贫血、严重的低色素性贫血。以出现晚幼红细胞或中幼红细胞为多见。外周血中出现有核红细胞表示骨髓中红细胞系增生明显活跃；②红血病、红白血病：骨髓中幼稚红细胞异常增生并释放入血，以原红细胞、早幼红细胞为多见；③髓外造血：骨髓纤维化时，脾、肝、淋巴结等组织恢复胚胎时期的造血功能，这些组织因缺乏对血细胞释放的调控能力，幼稚血细胞大量进入外周血。各发育阶段的幼红细胞都可见到，并可见到幼稚粒细胞及巨核细胞；④其他：如骨髓转移癌、严重缺氧等。

此外，有核红细胞稳定存在于妊娠妇女外周血中，其生命周期短，产后在妇女外周血中很快消失，用于产前诊断时不受上次妊娠的干扰。除此，在病理状态下具有相对较明显升高的特点，这有助于病理产科的无创产前诊断。在妊娠早期胎儿红系细胞比白系细胞发展得早，在卵黄囊和肝造血期，胎儿红细胞与白细胞比约1000:1，理论上妊娠早期进入母外周血的有核红细胞多于其他类型的胎儿细胞。有核红细胞含有胎儿完整的基因组，能用于胎儿遗传性疾病的分析研究，理论上，一个有核红细胞就可以进行胎儿遗传性疾病的分析和诊断。因此，捕获母亲外周血中的有核红细胞进行产前诊断或者对胎儿的各种可能的遗传疾病做出分析研究将有巨大的潜力。

现在捕获或富集有核红细胞的方法主要是密度梯度离心、磁激活细胞分选、荧光激活细胞分选、显微操作分离法和微流控装置，其中密度梯度离心和显微操作分离法是根据有核红细胞本身的密度和形态特征，磁激活细胞分选、荧光激活细胞分选和微流控装置是通过有核红细胞表面特异性表达的CD71抗原，使用针对CD71的抗体进行特异性的捕获。现有的能捕获CD71的配体包括转铁蛋白和CD71抗体等都有其相应的缺陷。转铁蛋白和抗体的制备成本较高，制备过程中的均一性差，并且不易修饰，而且捕获富集过程操作复杂。

核酸适体是通过体外指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution ofligands by exponential enrichment，SELEX)筛选得到的能够高亲和性和高特异性结合靶标分子的ssDNA或ssRNA。核酸适体与抗体相比，核酸适体分子量小(5-15kD)，制备方法是化学合成，易修饰，稳定性强、便于保存等优势。

我们发现核酸适体TY8能够识别CD71，该核酸适体可以作为CD71的有效配体，并且可以在外周血中识别用于疾病诊断，或者将捕获到的有核红细胞用作研究。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种灵敏度高、特异性强、操作简便，用于识别或富集有核红细胞的方法。

本发明的目的是采用以下技术方案实现的。

一种用于识别或富集有核红细胞的方法，利用核酸适体与外周血中的有核红细胞的特异性结合来识别或富集有核红细胞，所述的核酸适体序列如下：5＇-ACTCATAGGGTTAGGGGCTGCTGGCCAGATACTCAGATGGTAGGGTTACTATGAGC-3＇，SEQ NO.1。