[发明专利]鉴别菲牛蛭的特异性引物对和方法、应用

权利要求书

1.用于鉴定菲牛蛭的特异性引物对，其特征在于由引物FN-5’和引物FNFN-3’组成，所述引物FN-5’和所述引物FN-3’均为单链DNA分子，核苷酸序列依次为序列表中的序列1(5’-GTAATTAGAATCGTAATAGCTC-3’)和序列2(5’-CATAATTGAATATACATTTACAGCAGAA-3’)。

2.权利要求1所述特异性引物对的应用，其特征在于为如下a)-f)中任一种：

a)制备用于检测或辅助检测菲牛蛭的试剂盒；

b)检测或辅助检测待测样品中是否含有或候选含有菲牛蛭；

c)制备用于鉴定或辅助鉴定菲牛蛭的试剂盒；

d)鉴定或辅助鉴定待测样品是否为或候选为菲牛蛭；

e)制备用于鉴定或辅助鉴定市售菲牛蛭的真伪性的试剂盒；

f)鉴定或辅助鉴定市售菲牛蛭的真伪性。

3.含有权利要求1所述特异性引物对的试剂盒，其特征在于所述试剂盒用于鉴定或者辅助鉴定菲牛蛭。

4.权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括Taq DNA聚合酶、dNTP和反应缓冲液或水。

5.权利要求3所述的试剂盒的应用，其特征在于为如下b1)或b2)或b3)：

b1)检测或辅助检测待测样品中是否含有或候选含有菲牛蛭；

b2)鉴定或辅助鉴定待测样品是否为或候选为菲牛蛭；

b3)鉴定或辅助鉴定市售菲牛蛭的真伪性。

6.一种检测待测样品是否含有或候选含有菲牛蛭的方法，其特征在于包括如下步骤：提取待测样品的总DNA作为模板，采用权利要求1所述的特异性引物对进行PCR扩增，如果能够实现有效扩增，则所述待测样品中含有或候选含有菲牛蛭；如果不能实现有效扩增，则所述待测样品中不含有或候选不含有菲牛蛭。

7.一种鉴定待测样品是否为或候选为菲牛蛭的方法，其特征在于包括如下步骤：提取待测样品的基因组DNA作为模板，采用权利要求1所述的特异性引物对进行PCR扩增，如果能够实现有效扩增，则所述待测样品为或候选为菲牛蛭；如果不能实现有效扩增，则所述待测样品不为或候选不为菲牛蛭。

8.一种鉴定市售菲牛蛭的真伪性的方法，可包括如下步骤：提取市售菲牛蛭的基因组DNA作为模板，采用权利要求1所述的特异性引物对进行PCR扩增，如果能够实现有效扩增，则所述市售菲牛蛭为或候选为真品；如果不能实现有效扩增，则所述市售菲牛蛭为或候选为伪品。

9.如权利要求6或7或8所述的方法，其特征在于所述“能够实现有效扩增”为PCR扩增产物中含有300-400bp的DNA片段；所述“不能实现有效扩增”为PCR扩增产物中不含有300-400bp的DNA片段。

10.如权利要求6或7或8所述的方法，其特征在于进行所述PCR扩增时，采用的扩增程序具体可为94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s；35个循环；72℃延伸5min；所述PCR扩增的体系可为：总体积为20μl时，SYBR Premix Ex Taq II 10μl，FN-5’上游引物0.8μM，FN-3’下游引物0.8μM，模板10-30ng，灭菌蒸馏水补齐20μl。