[发明专利]利用p5126-ZmMs1M构建体创制玉米显性核雄性不育系及其育种制种应用方法

权利要求书

1.一种构建体在使转基因玉米表现显性核雄性不育的应用，其特征在于，该构建体由三种类型基因表达盒组成：（a）第一种表达盒，为导致玉米显性核雄性不育的基因表达盒；（b）第二种表达盒，为标记玉米种皮颜色的表达盒；（c）第三种表达盒，为除草剂抗性基因表达盒；其中，导致玉米显性核雄性不育的基因表达盒由花粉特异表达的玉米5126 启动子、雄花发育基因ZmMs1基因和农杆菌章鱼碱合酶Ocs基因的终止子可操作地相连，其序列如SEQ ID NO .1所示；标记玉米种皮颜色的表达盒由玉米种皮特异表达的Ltp2启动子、玉米种皮颜色标记基因即红色荧光基因mCherry和胭脂碱合成酶基因Nos终止子可操作地相连，其序列如SEQ ID NO .2所示；除草剂抗性基因的表达盒由花椰菜花叶病毒CaMV的35S启动子、除草剂抗性基因BAR和花椰菜花叶病毒的35S polyA终止子可操作地相连，其序列如SEQID NO.3所示，利用该构建体转化玉米，导致转基因玉米具有显性核雄性不育的功能，所述转化玉米的受体材料为可遗传转化的玉米自交系。

2.一种创制玉米显性核雄性不育植株和繁殖玉米显性核雄性不育种子的方法，包括：（a）提供第一植株，该植株是一种可用于遗传转化的玉米自交系材料；（b）创制第二植株，所述第二植株是向上述第一植株中引入显性核雄性不育构建体，且所述构建体只存在于玉米同源染色体的其中一条染色体上，即所述构建体为半合子状态，该植株表现为不依赖于其背景基因型的显性核雄性不育，（c）用所述第一植株的雄性配子给所述第二植株受精，产生的种子中有50%的基因型同第二植株，即所述构建体为半合子状态的显性核雄性不育种子，另外50%为非转基因的正常可育保持系种子；所述构建体由三种类型基因表达盒组成：（a）第一种表达盒，为导致玉米显性核雄性不育的基因表达盒；（b）第二种表达盒，为标记玉米种皮颜色的表达盒；（c）第三种表达盒，为除草剂抗性基因表达盒；其中，导致玉米显性核雄性不育的基因表达盒由花粉特异表达的玉米5126启动子、雄花发育基因ZmMs1基因和农杆菌章鱼碱合酶Ocs基因的终止子可操作地相连，其序列如SEQ ID NO .1所示；标记玉米种皮颜色的表达盒由玉米种皮特异表达的Ltp2启动子、玉米种皮颜色标记基因即红色荧光基因mCherry和胭脂碱合成酶基因Nos终止子可操作地相连，其序列如SEQ ID NO .2所示；除草剂抗性基因的表达盒由花椰菜花叶病毒CaMV的35S启动子、除草剂抗性基因BAR和花椰菜花叶病毒的35S polyA终止子可操作地相连，其序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求2所述的方法，其还包括鉴定具有所述构建体的植株的方法，具体为：（1）种植权利要求2中所述的显性核雄性不育种子；（2）使所述种子长成待鉴定植株；（3）用权利要求2中所述的除草剂抗性基因对应的除草剂喷洒所述待鉴定植株，具有所述构建体的植株与不含所述构建体的植株相比，没有植物损伤症状或具有的损伤症状程度更轻。

4.根据权利要求2所述的方法，其还包括鉴定具有所述构建体的种子的方法，具体为：权利要求2中所述步骤(c)产生的种子，在正常光下直接观察，全部是正常颜色种子；在绿色激发光下通过荧光滤镜观察，50%具有红色荧光的种子，即为含有所述构建体的显性核雄性不育系种子。