[发明专利]一种香樟精油细菌群体感应抑制剂的制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种植物精油的细菌群体感应抑制剂的制备方法及应用，所述的方法包括精油的制备和细菌群体感应抑制剂的制备。本发明从香樟叶片中获得香樟精油，经实验首次证实，本发明制备的精油具有抑制野生紫色杆菌群体感应系统的活性，导致紫色杆菌没有致病性，而且精油不会引起紫色杆菌产生生存压力，进而产生耐药性；本发明制备的精油可抑制大肠杆菌、紫色杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞杆菌的活性，是一种基于细菌群体感应抑制作用的新型抗菌物质。本发明具有原料易得、新型细菌群体感应抑制剂制备方法简单可靠、抑菌剂对细菌不产生耐药性和无毒害作用等优点和特点。

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种香樟精油细菌群体感应抑制剂的制备方法及应用。

背景技术

近年来，抗生素及抗菌药物在防治细菌性病害过程中被大量使用。传统抗菌药物通过干扰病原菌的生化代谢过程，影响其结构和功能，达到抑制和杀死细菌的作用。细菌在巨大的生存压力之下迅速变异，导致耐药细菌或超级细菌快速增加，给细菌性病害的防治带来诸多困难，故开发低耐药性的新型高效抗菌剂是研究者们一直努力的方向。细菌群体感应(Quorum sensing, QS)是细菌群体通讯的一种调控机制，指细菌产生并分泌特定信号分子，并通过信号分子的浓度变化来感知周围环境中细菌的数量变化，当信号分子达到一定浓度阈值时，启动或关闭相关基因的表达来适应环境的变化，QS赋予细菌大量个体在特定条件下共同表达部分基因的功能，从而在自然界生存竞争或与宿主互作过程中处于相对有利的地位，以保证种群的生存和繁衍。细菌生命活动中如致病因子的释放、生物膜的形成、荧光产生、孢子的形成、抗生素的形成、DNA 转录等都离不开群体感应的调控。研究表明，植物源的群体感应抑制剂（Quorum sensing inhibitors, QSI）在不抑制细菌生长的情况下能够抑制细菌的QS系统，降低病原菌的致病性，具有不易诱导细菌耐药性又可以起到防治细菌病害的优点。因此，以细菌群体感应为靶标的植物源生物防治剂的研发已成为热点。

香樟（Cinnamomum camphora），为樟科樟属常绿乔木，是我国亚热带绿阔叶林的主要树种之一，也是常用的绿化芳香树种。樟树的根、皮、叶和果实均可作为药用，且根、茎、叶和果实均含有精油。对其详细研究发现香樟精油能够强烈抑制紫色杆菌QS系统的活性。目前尚未见该化合物具有抑制紫色杆菌QS活性的报道，香樟叶片精油的抗菌活性是否和香樟叶片精油的群体感应抑制活性有关仍不清楚。

发明内容

本发明旨在提供一类来源于植物的新型、环保的具有抑制细菌QS系统的抑制剂，所获得的精油化合物能够用于研发新型抗菌先导药物来制备抗菌剂，防治细菌性病害。本发明以细菌群体感应抑制活性为追踪手段，从香樟植物中提取和制备细菌群体感应抑制剂和抗菌剂。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种香樟精油细菌群体感应抑制剂的制备方法，具体包括以下步骤：

（1）香樟叶片预处理：将采摘的香樟叶片洗净后晾干，置于-20℃冰箱中备用；

（2）将步骤（1）处理好的香樟叶片置于圆底烧瓶中，按照料液质量比1:10加入蒸馏水，于精油提取器中蒸馏提取2h，提取完成后用离心管收集精油，离心管中加入1g无水硫酸钠以去除多余的水分，获得具有细菌群体感应抑制活性的香樟精油。

（3）将制备得到的香樟精油用甲醇-水稀释至亚致死浓度下，即获得香樟精油细菌群体感应抑制剂。

步骤（3）所述甲醇-水为甲醇和水按照体积比1:200混合均匀。

步骤（3）所述亚致死浓度为2.5mg/mL。

进一步地，将上述制备得到的香樟精油细菌群体感应抑制剂应用于制备抗菌先导药物中。

本发明的有益效果在于：