[发明专利]促进猪血木快速繁殖的方法

说明书

本发明公开了促进猪血木快速繁殖的方法，包括：将获得的猪血木丛生芽转接到生根壮苗培养基中培养，得猪血木幼苗；其中，所述生根壮苗培养基包括上层培养基和下层培养基，所述上层培养基为：3/4MS+2.2‑2.6mg/L 6‑BA+1.3‑1.8mg/L ZT+1.0‑1.5mg/L 2,4‑D+1‑5g/L羊角灰粉；所述下层培养基为：1/2MS+2.0‑3.0mg/L 6‑BA+1.0‑1.5mg/L 2,4‑D+1.0‑1.5mg/L MET+0.5‑1.0mg/L氯化胆碱+15‑20g/L羊角灰粉。本发明的方法可有效提高猪血木的增殖系数，为猪血木的保护提供了一种新的路径。

技术领域

本发明涉及组织培养领域。更具体地说，本发明涉及一种促进猪血木快速繁殖的方法。

背景技术

猪血木(Euryodendron excelminum H.T.Chang)属于山茶科(Theaceae)猪血木属多年生木本植物，为我国特有单型属的珍稀濒危植物，已被列为国家二级保护植物。猪血木在自然状况下以有性繁殖为唯一繁殖方式，但其种子萌发和幼苗生长受环境影响严重，种群自然更新困难。

发明内容

本发明的目的是提供一种促进猪血木快速繁殖的方法，其以猪血木的种子，采用组织培养的方式可快速获得猪血木幼苗，该方法可有效提高猪血木的增殖系数，达5.1-5.3倍，畸形苗率低至1.8％，幼苗成活率高达92.3％，幼苗平均株高96mm，有效解决了猪血木自然更新困难的问题，为猪血木的保护提供了一种新的路径。

为了实现根据本发明的目的和其它优点，提供了一种促进猪血木快速繁殖的方法，包括以下步骤：

A、取成熟的猪血木种子，经处理后，得外植体；

B、将所述外植体置于无菌苗培养基中培养，得无菌苗；

C、将所述无菌苗切割成小段，转接至丛生芽诱导培养基中培养，得丛生芽；

D、将所述丛生芽转接到生根壮苗培养基中培养，得猪血木幼苗；

其中，所述生根壮苗培养基包括上层培养基和下层培养基，所述上层培养基为：3/4MS+2.2-2.6mg/L 6-BA+1.3-1.8mg/L ZT+1.0-1.5mg/L 2,4-D+1-5g/L羊角灰粉；所述下层培养基为：1/2MS+2.0-3.0mg/L 6-BA+1.0-1.5mg/L 2,4-D+1.0-1.5mg/L MET+0.5-1.0mg/L氯化胆碱+15-20g/L羊角灰粉；培养条件为：先于22-26℃，黑暗条件下培养3d，再于22-26℃，光照强度1400-1600lux，光照时间8h/d的条件下培养20d，最后于28-30℃，相对湿度为60-80％，遮光度为30-40％的自然光照条件下培养20d。

优选的是，所述的促进猪血木快速繁殖的方法，所述上层培养基的厚度为1-3cm，所述下层培养基的厚度为4-6cm。

优选的是，所述的促进猪血木快速繁殖的方法，所述羊角灰粉的制备方法为：将羊角用水洗净、沥干，于550-600℃高温煅烧后，冷却，制得。

优选的是，所述的促进猪血木快速繁殖的方法，步骤A中，所述处理具体为：将其置于装有纳米氧化锌水分散液的软包装袋中，浸没、封口，于室温下放置24h后，将所述软包装袋置于超高压容器中，于100-110MPa下处理1-6min，将所述猪血木种子从所述软包装袋中取出，用无菌水冲洗6-8次并用消毒滤纸吸取其表面的水分。

优选的是，所述的促进猪血木快速繁殖的方法，所述纳米氧化锌水分散液的质量百分浓度为1-2‰。

优选的是，所述的促进猪血木快速繁殖的方法，步骤B中，所述无菌苗培养基具体为：MS+2.0-2.5mg/L ZT+1.0-1.5mg/L NAA+0.3-0.5mg/L芸苔素；培养条件为：于培养温度25-28℃，光照强度1800-2000lux，光照时间5-6h/d的条件下培养18d。