[发明专利]一种肌肽水解酶、基因、突变体及其应用

权利要求书

1.一种肌肽水解酶，其特征在于，其是如下(a)或(b)的蛋白质：

蛋白质(a)：由SEQ ID No.2所示氨基酸序列组成的蛋白质；

蛋白质(b)：由SEQ ID No.2所示氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而得到的具有肌肽水解酶活性的由(a)衍生的蛋白质。

2.根据权利要求1所述一种肌肽水解酶，其特征在于，所述蛋白质(b)具有如下序列：

(1)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第18位谷氨酸替换为苏氨酸，第22位赖氨酸替换为丙氨酸，第67位苯丙氨酸替换为丙氨酸；

(2)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第17位苏氨酸替换为丙氨酸，第39位甘氨酸替换为天冬氨酸；

(3)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第18位谷氨酸替换为苏氨酸；

(4)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第22位赖氨酸替换为天冬氨酸，第64位精氨酸替换为谷氨酸；

(5)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第22位赖氨酸替换为天冬氨酸，第64位精氨酸替换为谷氨酸，第93位半胱氨酸替换为苏氨酸；

(6)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第39位甘氨酸替换为丙氨酸，第114位缬氨酸替换为天冬酰胺；

(7)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第39位甘氨酸替换为丙氨酸，第93位半胱氨酸替换为苏氨酸，第114位缬氨酸替换为天冬酰胺，243位天冬酰胺替换为丝氨酸；

(8)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第44位赖氨酸替换为甘氨酸，第93位半胱氨酸替换为苏氨酸，243位天冬酰胺替换为丝氨酸；

(9)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第44位赖氨酸替换为甘氨酸，第64位精氨酸替换为谷氨酸，第67位苯丙氨酸替换为丙氨酸；第243位天冬酰胺替换为亮氨酸；

(10)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第64位精氨酸替换为谷氨酸，第67位苯丙氨酸替换为丙氨酸；

(11)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第64位精氨酸替换为谷氨酸，第67位苯丙氨酸替换为丙氨酸；第243位天冬酰胺替换为亮氨酸；

(12)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第67位苯丙氨酸替换为丙氨酸，第93位半胱氨酸替换为异亮氨酸，第114位缬氨酸替换为天冬酰胺，第243位天冬酰胺替换为亮氨酸；

(13)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第93位半胱氨酸替换为异亮氨酸，第114位缬氨酸替换为酪氨酸；

(14)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第93位半胱氨酸替换为异亮氨酸，第114位缬氨酸替换为酪氨酸，第243位天冬酰胺替换为亮氨酸；

(15)将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第93位半胱氨酸替换为异亮氨酸，第243位天冬酰胺替换为亮氨酸。

3.一种分离的核酸，其特征在于，所述核酸编码如权利要求1或2所述的肌肽水解酶。

4.一种重组表达载体，其特征在于，包含如权利要求3所述的核酸。

5.一种重组表达转化体，其特征在于，包含如权利要求4所述的重组表达载体。

6.一种如权利要求1或2所述肌肽水解酶的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：培养如权利要求5所述的重组表达转化体，分离获得重组表达的肌肽水解酶。

7.一种如权利要求1或2所述肌肽水解酶在合成L-肌肽中的应用，其特征在于，包括以下步骤：使用如权利要求1或2所述肌肽水解酶，催化β-丙氨酸和L-组氨酸的逆水解反应生成L-肌肽，然后从反应混合物分离提取产物L-肌肽。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肌肽水解酶还可以是将如权利要求1或2所述的肌肽水解酶固定于载体上所获得的固定化酶；

优选地，所述的载体为高分子树脂，含有环氧基团或氨基基团。