[发明专利]用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的ELISA试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的ELISA试剂盒，其特征在于：包括包被有夏科雷登氏结晶蛋白CLC抗体的酶标板。

2.根据权利要求1所述的用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的ELISA试剂盒，其特征在于：所述包被有夏科雷登氏结晶蛋白CLC抗体为小鼠抗人CLC单克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的ELISA试剂盒，其特征在于：所述酶标板的每个微孔内所述夏科雷登氏结晶蛋白CLC抗体的包被量为0.1～1μg。

4.根据权利要求1所述的用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的ELISA试剂盒，其特征在于：进一步还包括夏科雷登氏结晶蛋白CLC标准品及其标准品稀释液、TMB底物显色液、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液、终止溶液和洗涤液。

5.根据权利要求4所述的用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的ELISA试剂盒，其特征在于：所述标准品为重组CLC蛋白；

所述标准稀释液包括吐温20、牛血清白蛋白和磷酸缓冲盐溶液；

所述检测溶液A工作液包括采用标准品稀释液稀释成浓度1～10μg/mL的生物素标记的人CLC抗体；

所述检测溶液B工作液包括采用标准品稀释液稀释成浓度0.5～5μg/mL的抗生物素抗体结合的辣根过氧化物酶；

所述终止溶液为硫酸；

所述洗涤液包括吐温20和磷酸缓冲盐溶液。

6.根据权利要求1所述的用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的ELISA试剂盒，其特征在于：包被有夏科雷登氏结晶蛋白CLC抗体的酶标板的制备方法，包括以下步骤：将小鼠抗人CLC单克隆抗体用磷酸缓冲盐溶液稀释，取酶标板，向其加入稀释好的小鼠抗人CLC单克隆抗体，4℃过夜弃上清后洗板，每孔加入封闭液，再次弃上清后洗板。

7.一种权利要求1～6任一项所述的用于检测慢性鼻窦炎伴鼻息肉亚型的ELISA试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：制备包被有夏科雷登氏结晶蛋白CLC抗体：将小鼠抗人CLC单克隆抗体用磷酸缓冲盐溶液稀释；

步骤二：制备包被有夏科雷登氏结晶蛋白CLC抗体的酶标板：取酶标板，每孔加入稀释好的小鼠抗人CLC单克隆抗体，4℃过夜弃上清后加入洗涤液洗板，每孔加入封闭液，再次弃上清后加入洗涤液洗板；

步骤三：倍比稀释标准品：取标准品，向其加入标准品稀释液，制备得到浓度为Xng/mL的标准品，取浓度为Xng/mL的标准品进行倍比稀释，依次倍比稀释浓度为：Xng/mL，0.5Xng/mL，0.25Xng/mL，0.625Xng/mL，0.3125Xng/mL，0.15625Xng/mL，0.078125Xng/mL；

步骤三：样品稀释：取出样本至室温，并进行梯度稀释处理；

步骤四：装样：取步骤二制备的包被有夏科雷登氏结晶蛋白CLC抗体的酶标板，每孔分别依次加入步骤三的倍比稀释后的标准品和步骤四的稀释后的样品，同时设置添加有标准品稀释液的空白孔，孵育后加入洗涤液洗板；

步骤五：制备检测溶液A工作液：取生物素标记的人CLC抗体采用标准品稀释液稀释成1～10μg/mL后加入至酶标板的每个孔内，覆膜并孵育后加入洗涤液洗板；

步骤六：制备检测溶液B工作液：采用标准品稀释液稀释成浓度0.5～5μg/mL的抗生物素抗体结合的辣根过氧化物酶后加入至酶标板的每个孔内，覆膜并孵育后加入洗涤液洗板；

步骤七：显色：取TMB加入同等体积0.75％双氧水后制备得到TBM底物显色液并加入至酶标板的每个孔内，当观察添加有浓度为Xng/mL的标准品的孔变成棕黄色后，酶标板的每个孔加入终止溶液，待添加有浓度为Xng/mL的标准品的孔由黄色变为蓝色时，采用酶标仪450nm检测波长检测，550nm-570nm参考波长比色，制作标准曲线计算样品浓度值。