[发明专利]一种谷胱甘肽的检测方法

说明书

本发明提供了一种谷胱甘肽的检测方法，具体原理为：由于Ce(IV)离子能够使3,3′,5,5′‑四甲基联苯胺(TMB)发生氧化反应生成蓝色的TMB亚胺盐。当向Ce(IV)/TMB体系中加入微量谷胱甘肽时，谷胱甘肽与TMB亚胺盐发生还原反应，使体系蓝色变浅，且变浅的程度与谷胱甘肽的浓度有成正比，据此建立了一种检测谷胱甘肽的方法，该方法操作简单，能快速实时的对谷胱甘肽的浓度进行检测。与现有技术相比，本发明提供的方法操作简单，能快速实时的对谷胱甘肽的浓度进行检测，而且，检测限低，能够到达可低至2μM，检测方法灵敏度高，准确度高、误差小。

技术领域

本发明属于检测领域，具体涉及一种谷胱甘肽的检测方法。

背景技术

谷胱甘肽(glutathione,r-glutamyl cysteingl+glycine,GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成。存在于几乎身体的每一个细胞。谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性的食品广泛应用。因此，开发设计一种可以检测低浓度谷胱甘肽的方法具有重要的理论价值和应用价值。

目前，谷胱甘肽的主要检测方法有酶循环法、比色法、高效液相色谱法、高效毛细管电泳法、流式细胞仪法、荧光法等。其中，酶方法对实验条件的要求过高，酶的稳定性对于实验结果影响较大；色谱法操作费时，繁琐复杂；荧光法易受干扰，误差较大；而分光光度法所需仪器价格便宜且操作简便。因此开发一种新的分光光度法检测谷胱甘肽具有很重要的意义。

发明内容

本发明目的在于提供一种谷胱甘肽的检测方法，由于Ce(IV)离子能够使3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)发生氧化反应生成蓝色的TMB亚胺盐。当向Ce(IV)/TMB体系中加入微量谷胱甘肽时，谷胱甘肽与TMB亚胺盐发生还原反应，使体系蓝色变浅，且变浅的程度与谷胱甘肽的浓度有成正比，据此建立了一种检测谷胱甘肽的方法，该方法操作简单，能快速实时的对谷胱甘肽的浓度进行检测。

本发明具体技术方案如下：

一种谷胱甘肽的检测方法，具体为：

将3,3′,5,5′-四甲基联苯胺TMB溶液和Ce(IV)溶液混合，然后分别加入不同量的谷胱甘肽溶液，分别测量吸光度，构建吸光度与谷胱甘肽浓度的线性关系，利用此线性关系检测未知浓度的谷胱甘肽。

进一步的，所述检测方法在22-27℃条件下进行。

进一步的，检测时，体系中3,3′,5,5′-四甲基联苯胺TMB终浓度大于80μM，优选的为90μM。

检测时，体系中Ce(IV)的终浓度为60μM。

进一步的，检测时，体系中谷胱甘肽最终浓度分别为:0μM、2μM、4μM、6μM、8μM、10μM、12μM、14μM、16μM和18μM。

进一步的，测量吸光度前，调节体系pH至3.0～7.0，优选的，调节pH至6.0。

进一步的，测量的是654nm处的吸光强度。

进一步的，构建的线性关系为：线性方程A＝0.496-0.022C且线性相关系数R²为-0.998。

优选的，具体检测方法为：