[发明专利]一种妊娠特异性糖蛋白3的兔多克隆抗体的制备方法在审
申请号: | 201811433190.0 | 申请日: | 2018-11-28 |
公开(公告)号: | CN109575131A | 公开(公告)日: | 2019-04-05 |
发明(设计)人: | 鲁江徽;刘峰;谢龙生 | 申请(专利权)人: | 必欧瀚生物技术(合肥)有限公司 |
主分类号: | C07K16/18 | 分类号: | C07K16/18 |
代理公司: | 合肥天明专利事务所(普通合伙) 34115 | 代理人: | 赵瑜;金凯 |
地址: | 230088 安徽省合肥市高新区*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 兔多克隆抗体 特异性糖蛋白 高纯度 抗血清 抗体 制备 妊娠 亲和层析纯化 生物技术领域 免疫新西兰 长期保存 免疫血清 无菌过滤 诱导表达 原核表达 重组表达 重组蛋白 大白兔 免疫原 重组菌 效价 发酵 蛋白 保存 | ||
1.一种妊娠特异性糖蛋白3的兔多克隆抗体的制备方法,以PSG3重组蛋白作为免疫原免疫兔子获得抗血清,再将血清经过亲和层析纯化获得高纯度的多抗,其特征在于:所述的免疫共4次,包括初次免疫和3次加强免疫,所述初次免疫是将PSG3重组抗原和弗氏完全佐剂1:1乳化后进行免疫,所述加强免疫的前两次是将PSG3重组抗原和弗氏不完全佐剂1:1乳化后进行免疫,第三次加强免疫是将PSG3重组抗原直接注射免疫。
2.根据权利要求1所述的一种妊娠特异性糖蛋白3的兔多克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述初次免疫和/或加强免疫时所取的PSG3重组抗原的量为1.5-3mg。
3.根据权利要求1所述的一种妊娠特异性糖蛋白3的兔多克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述初次免疫和/或前两次加强免疫的注射方式为兔子背部多点皮下注射。
4.根据权利要求1或3所述的一种妊娠特异性糖蛋白3的兔多克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述第三次加强免疫的注射方式为兔子耳缘静脉注射。
5.根据权利要求1或2所述的一种妊娠特异性糖蛋白3的兔多克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述初次免疫和/或加强免疫时注射的计量为0.3-0.8mL。
6.根据权利要求1所述的一种妊娠特异性糖蛋白3的兔多克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述4次免疫的每次免疫间隔时间为8-12天。
7.根据权利要求1所述的一种妊娠特异性糖蛋白3的兔多克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述免疫的兔子为新西兰大白兔,雌性,初次免疫时体重在1.5-2.0kg。
8.根据权利要求1所述的一种妊娠特异性糖蛋白3的兔多克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述乳化为完全乳化,乳化后的抗原滴在冷水上经久不散。
9.根据权利要求1所述的一种妊娠特异性糖蛋白3的兔多克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述抗血清的获取步骤为,对免疫完成的兔子进行心脏取血,将全血在37℃条件下静置1h,再置于2-8℃条件下静置过夜,吸取上清即为兔抗血清,全程无菌操作。
10.根据权利要求1所述的一种妊娠特异性糖蛋白3的兔多克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述亲和层析方法为采用rProienG亲和柱配套纯化仪进行抗体纯化。
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