[发明专利]一种辛荑花组织培养再生体系构建方法

说明书

本发明公开了一种辛荑花组织培养再生体系构建方法，辛荑花通过无性快繁技术获得株性稳定种苗的技术方法。本发明以辛荑花未成熟胚为外植体，经过种子消毒、胚愈伤组织诱导、分化培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤构建了辛荑花组织培养再生体系，既解决辛荑花优质种苗缺乏的问题，又可为今后开展辛荑花遗传转化工作奠定基础。

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种辛荑花组织培养再生体系构建方法。

背景技术

辛荑花别名：木笔、春花、木兰。分布陕西、四川、河南、湖北。多生于山林间或栽培于城镇具、村落。冬蕾于冬末春初未开放时采摘，阴干备用。味辛，性温。具有散风热，通鼻窍。常规辛荑花育种技术具有局限性，如远缘杂交困难、有益突变频率低、选育优良品种耗时长、花期不遇等，制约了优质资源的利用，使得品种选育工作难以取得突破性的进展。而植物组织培养技术具有加速育种进程、缩短繁殖时间、改良植物品质、节省空间、减少劳动、可终年生产、不受自然条件限制等特点，可有效解决品种选育耗时长的问题。近年来辛荑花组织培养研究方面取得了一定的进展，但依然存在一些问题，如外植体褐化现象严重、出梢率低、生根困难、移栽大田成活率低等，使组织培养技术在辛荑花中的应用受到很大的限制。因此，非常有必要建立系统的离体快繁体系，为今后对辛荑花进行品质遗传改良奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供出一种辛荑花组织培养再生体系构建方法，本发明以辛荑花未成熟胚为外植体，经过种子消毒、胚愈伤组织诱导、分化培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤构建了辛荑花组织培养再生体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种辛荑花组织培养再生体系构建方法，包括以下的步骤：

步骤1，种子消毒：选择未成熟果子，去叶后于洗衣粉水浸泡28min，刷净后自来水冲洗3h，取出尚未成熟的乳白或略带棕色的种子，在超净工作台中，剥开外种皮，先用75%乙醇消毒31s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒24min，用无菌水冲洗8次后备用；

步骤2，胚愈伤组织诱导：将经步骤（1）处理后未成熟种胚切成0.7cm×0.7cm×0.7cm接种到诱导培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养41天，然后置于每天光照8小时，光照强度为1400lx，直至诱导形成胚性愈伤组织；诱导培养基为：ER+6-BA4mg/L+NAA0.5mg/L+GA₃6mg/L+蔗糖16g/L+琼脂3.3g/L，pH为5.3；

步骤3，分化培养：将步骤（2）培养获得的呈绿色的子叶愈伤组织转入分化培养基上进行分化培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养16天，然后置于每天光照11小时，光照强度为2900lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成丛生芽；分化培养基为：ER+6-BA5.2mg/L+IBA0.6mg/L+蔗糖14g/L+琼脂3.0g/L，pH为5.3；

步骤4,生根培养：将步骤（3）过程获得的高度约为2.3cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养16天，然后置于每天光照12小时，光照强度为1900lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+IBA1.3mg/L+GGR2.1mg/L+KT3.1mg/L+蔗糖34g/L+琼脂6.1g/L，pH为5.3。

步骤5，炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约5cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和粘土混合成的基质中并定植于大田中。

与现有技术相比本发明的优点是：目前国内关于辛荑花组培快繁技术尚未成熟，而本发明具有简单、易行、经济的特点。通过本发明育成的辛荑花试管苗移栽成活率达到90%以上，可以有效解决辛荑花种苗缺乏的问题。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。