[发明专利]一种具有拮抗作用的高纯度放线菌提取液的制备方法

说明书

本发明公开了一种具有拮抗作用的高纯度放线菌提取液的制备方法，涉及微生物技术领域，包括以下步骤：A：土壤采集、B：样品处理、C：微波处理、D：稀释、E：分离、F：拮抗细菌筛选、G：拮抗细菌复筛、H：扩增、I：检测、J：提取。本发明通过在土壤中提取出放线菌，能够抑制病原菌对太子参和茶树的侵害，避免植物受病原菌侵染后的生长缓慢、肉质根瘦小、产量低和品质差的问题出现，提高了植物的产量，保证了农民的收入，通过提取放线菌来治疗农作物的生长问题，具有无毒无残留、不污染环境等优点，一方面增加了农作物的产量，另一方面对土壤起到了保护作用，有利于生物防治制剂的生产与储存。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种具有拮抗作用的高纯度放线菌提取液的制备方法。

背景技术

茶树原产于中国，是山茶科山茶属的多年生常绿木本植物，喜荫好湿，多分布于亚热带地区，福建省多数地区植被茂盛、山高云雾多，利于茶树的生长发育，因此福建的茶叶种植面积不断扩大，长期以来福建茶叶产量位居全国第一，而宁德市是福建省最大的产茶地级市，其种植面积与产量约占全省的1/3。

据相关报道统计，我国现已记载的茶树病害有100多种，其中较为常见的有30多种，这些病害的分布具有一定的地域性和垂直性，主要病原菌的侵染方式也不尽相同。其中炭疽病是茶树发病较为严重的病害之一，尤其是在湿度大的年份和温润多雨的季节发病最为严重，主要侵染茶树的叶部，造成大量落叶，影响茶叶的产量和质量，给种植农户造成重大的经济损失。

太子参，又名孩儿参、童参，是石竹科太子参属的多年生草本植物。以干燥的块根入药，具益气健脾、补气生津之功效。药材主产于宁德柘荣、湖南、贵州、江苏等地区，其中以柘荣县生产的太子参最为出名。

“柘荣太子参”产业已成为柘荣县的支柱产业之一，全县约90％农户种植太子参，太子参种植面积约占农作物总播种面积的1/5，已成为继水稻、甘薯之后的第三大农作物^[9]，是当地农民增加收入的重要来源。

目前，太子参种植方面也出现一些共性问题，由于种植模式单一，加之多年的块根繁殖使得当初的品种逐步开始退化，叶斑病等病害发生频率增加，势必造成了产量和品质的下降，影响当地农民的收入。病原菌侵染后的发病植株生长缓慢、肉质根瘦小、产量低、品质差，对生产造成严重威胁。

因此，发明一种具有拮抗作用的高纯度放线菌提取液的制备方法来解决上述问题很有必要。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种具有拮抗作用的高纯度放线菌提取液的制备方法，解决了现有的太子参和茶树生长受病原菌影响的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种具有拮抗作用的高纯度放线菌提取液的制备方法，包括以下步骤：

A：土壤采集：从太子参和茶树的土地里采集土样若干份，然后将采集后的土样置于无菌信封袋中放置于通风处干燥1-5天，然后去除小石块和草根；

B：样品处理：用天平称取5g经风干过的土壤样品，然后将土壤样品放置于离心管中，在土壤样品的表面稍微喷洒一些无菌水来湿润土壤样品，再静置2-6min，再把离心管放入盛有600mL自来水的水浴杯中；

C：微波处理：再将其置于微波炉中，用灭菌针管吸取无菌水冲洗土壤样品，再转入装有90mL无菌水的广口锥形瓶中，然后放入摇床中震荡10-30min，最后再静置10-20min；

D：稀释：称取10g的土壤样品倒入锥形瓶中，放入摇床中震荡20-40min，用无菌纸浆震荡处理后的样品过滤，再用0.1mL的无菌吸管吸取10^-1稀释液；