[发明专利]一种小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法

权利要求书

1.一种小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 取出成年小鼠腿部组织，修剪去除周边结缔组织和肌肉，然后浸泡75%酒精，再以预冷含双抗的PBS缓冲液反复清洗2次； (2) 用5 ml注射器吸取M199培养基冲出骨髓组织直至骨髓腔变白；(3) 收集骨髓液，1200~1500 rpm离心5 min，去掉上清液，保留沉淀；(4) 取两个15 ml离心管，各加入4 ml淋巴分离液。将上述沉淀用M199培养基重悬，按1:2比例将此重悬液加入分离液上方；(5) 然后将离心管放入水平式低速离心机中，2000 rpm离心20 min，离心结束后，吸取中间白膜层细胞到50ml离心管中，1200~1500 rpm离心5 min，去掉上清液，保留沉淀；(6) 沉淀用M199培养基清洗1次，1200~1500 rpm离心5 min，弃上清，保留沉淀；(7)完全培养基配制：M199培养基中加入胎牛血清，碱性成纤维细胞生长因子，血管内皮生长因子，青霉素和链霉素；(8) 沉淀加完全培养基重悬，接种纤维连接蛋白包被的25 cm²培养瓶，于37 ℃、5% CO₂培养箱培养；(9) 接种24 h后进行首次换液，之后每隔3 d换液；(10)诱导分化；(11) 细胞形态观察与鉴定。

2.根据权利要求1所述的小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法，其特征在于步骤(1)所述的预冷PBS缓冲液浓度为0.01 M，PH值为7.2~7.4。

3.根据权利要求1所述的小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法，其特征在于步骤(4)所述的淋巴分离液密度为1.077~1.080g/cm³。

4.根据权利要求1所述的小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法，其特征在于步骤(7)所述的培养基为含20%胎牛血清，100 u/ml青霉素，100 ug/ml链霉素、10 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子和10 ng/ml血管内皮生长因子的M199培养基，PH值为7.2~7.4。

5.根据权利要求1所述的小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法，其特征在于步骤(8)所述的培养瓶用浓度为5 ug/ml的纤维连接蛋白包被。