[发明专利]一种紫花三叉白芨种子无菌诱导植株再生的组培方法

说明书

本发明涉及紫花三叉白芨组织培养技术领域，具体涉及一种紫花三叉白芨种子无菌诱导植株再生的组培方法，包括以下步骤：步骤一，选取颗粒饱满、色泽正常、大小均一、生长健壮的紫花三叉白芨种子，先用去离子水冲洗3min，随后置于70％酒精中浸泡5min，再移置杀菌液中处理6‑10min，随后采用无菌蒸馏水冲洗4‑6次，置于无菌环境中备用。发明的紫花三叉白芨种子无菌诱导植株再生的组培方法，相对于常规技术中，本发明在杀菌过程中，先在70％酒精中浸泡5min，再移置杀菌液中处理，杀菌液采用石墨烯溶液、壳聚糖、蒙脱土分散液以及高锰酸钾组成的杀菌液。

技术领域

本发明涉及紫花三叉白芨组织培养技术领域，具体涉及一种紫花三叉白芨种子无菌诱导植株再生的组培方法。

背景技术

白芨又名连及草，甘根、白给、朱兰、紫兰等为兰科白芨属多年生草本球茎植物，白芨的药用部分分为干燥块茎，其性平、微寒，味苦、甘、涩，有收敛止血功效，主要用于吐血、外伤出血、皮肤皲裂等，白芨品种大致分为两个大类，一类为紫花白芨，花紫红色，叶披针或广披针形，先端渐尖，基部下延成鞘状抱茎，包含大种、小种两小类，另一类为黄花白芨，其花黄色，叶条状披针形，紫花三叉白芨的供需量差额太大，造成大量采集和消耗植物资源，再加上南方各省的丘陵山区森林覆盖率进一步加大，也可加剧野生白芨产量年年下降，当采集和消耗量超过自然资源的再生能力时，会导致物种的濒危。

现有紫花三叉白芨种子无菌诱导其植株再生技术还未完全成熟，在组培过程中种子感菌率较高，同时种子萌发率较差，因此本发明针对这一现状进一步的研究，完善无菌诱导植株再生技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种紫花三叉白芨种子无菌诱导植株再生的组培方法，包括以下步骤：

步骤一，选取颗粒饱满、色泽正常、大小均一、生长健壮的紫花三叉白芨种子，先用去离子水冲洗3min，随后置于70％酒精中浸泡5min，再移置杀菌液中处理6-10min，随后采用无菌蒸馏水冲洗4-6次，置于无菌环境中备用；

步骤二，将步骤一备用的种子先进行辐照处理，处理30-40s，随后接种于初代培养基MS上，置于培养室，30d后观察萌芽和生长状况；

步骤三，将步骤二萌发的无菌幼苗转移到增殖培养基中，60d后再转移到生根培养基中，培养40d后，再炼苗移栽，即可。

作为本发明的进一步方案是：所述步骤一中杀菌液制备方法为将石墨烯粉、去离子水按照3:7进行混合搅拌，配制成石墨烯溶液，随后加入石墨烯溶液总量10％的壳聚糖溶液，继续搅拌5-15min，至壳聚糖充分溶解，随后再加入质量分数为10-20％的高锰酸钾溶液，最后加入壳聚糖总量70-80％的蒙脱土分散液，搅拌均匀，即可。

作为本发明的进一步方案是：所述蒙脱土分散液制备方法为将蒙脱土进行研磨，过20-100目筛，随后进行水浴加热，加热温度为65-75℃，加热25-35min，随后再超声分散15-25min，即可。

作为本发明的进一步方案是：所述步骤二中辐照处理条件为采用紫外线辐照，辐射总剂量2.0-3.0kGy，辐照计量率为20-30Gy/min。

作为本发明的进一步方案是：所述步骤二中辐照处理条件为采用紫外线辐照，辐射总剂量2.5kGy，辐照计量率为25Gy/min。

作为本发明的进一步方案是：所述培养室条件为光照强度为2000Lx，湿度为55-65％，时间为12h/d。

作为本发明的进一步方案是：所述增殖培养基为MS+6-BA 1.2mg/L+IBA 0.1mg/L+GA₃1.5mg/L。

作为本发明的进一步方案是：所述生根培养基为1/2MS+AC 0.05g/l+IBA 1.0mg/L+蔗糖15g/L。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：