[发明专利]一种纯系全雄杂交黄颡鱼及其亲本的选育方法

说明书

本发明公开了一种纯系全雄杂交黄颡鱼及其亲本的选育方法，从洞庭湖水系精选性状优异的野生原系黄颡鱼及瓦氏黄颡鱼，同步应用细胞工程遗传育种技术，对野生原系品种提纯复壮，选育出纯系黄颡鱼及纯系瓦氏黄颡鱼全雌鱼；以纯系瓦氏全雌鱼为原料鱼，研发优质瓦氏黄颡鱼超雄鱼；并建立纯系全雌鱼和超雄鱼种质库。对原种不断提纯复壮，确保种苗纯正、遗传基因稳定可控。优质瓦氏黄颡鱼超雄鱼与纯系黄颡鱼全雌鱼组合，大规模人工繁殖纯系全雄杂交黄颡鱼鱼苗。本发明从亲本源头上彻底解决了杂交黄颡鱼种质代代退化、生长优势下降、抗病抗逆力弱等难题，从苗种开始，养殖全过程基本不用药，确保了食品安全。

技术领域

本发明属于鱼类细胞工程遗传育种技术领域，具体涉及一种纯系全雄杂交黄颡鱼及其亲本的选育方法。

背景技术

杂交育种技术，因杂交苗种具杂交优势而被广泛采用。但杂交黄颡鱼父母本的选育与提纯复壮工作，一直被人们忽略，加上连年使用商品鱼筛底“毛毛鱼”作亲本近亲繁殖，种质急剧退化，鱼病频发，用药加重，危害食品安全。传统的选育种方法虽有多种，效果最佳者为连续十四代同胞兄妹近亲繁殖选育良种，但这种方法需耗时14—20年，中间环节略有差错，则前功尽弃，必须重头做起。而使用高科技手段——应用鱼类细胞工程遗传育种技术，对野生原系亲本进行两代雌核发育，令其基因位点完全纯合，仅历时两年便达到连续十四代同胞兄妹近亲繁殖(且期间操作必须全过程无一失误)选育的纯度，即达到纯系原种的准则。另外，由于杂交黄颡鱼雌雄个体及长速差异达2—3倍，必须应用全雄遗传育种技术，生产遗传性的纯系全雄杂交黄颡鱼鱼苗取代普通杂交苗供全国养殖。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种纯系全雄杂交黄颡鱼及其亲本的选育方法。

本发明所采用的技术方案主要是：一种纯系全雄杂交黄颡鱼及其亲本的选育方法，包括以下步骤：

(1)建立纯系黄颡鱼全雌鱼种质库，将野生原系黄颡鱼雌鱼经过两代雌核发育，选育出纯系全雌黄颡鱼，并建立纯系黄颡鱼全雌鱼种质库，其中，第一代雌核发育包括以下步骤：

A、遗传物质灭活的异源精子的制备，将取自珠江水系的大口鲶雄鱼按公斤体重注射LHRH-A2 5-10μg催熟，10小时后人工取精2g，用精子保存液稀释3倍，搅匀并平铺在玻璃器皿上，厚度不超过0.5mm，置于微型振荡器上，启动微型振荡器，用波长2537埃的紫外线灯作辐射源，照射25min，从而获得遗传失活的异源精子；

B、鱼卵的收集与授精,将从“八百里洞庭”湖区垂钓渔船上选取的野生原系黄颡鱼雌鱼按每公斤体重注射LHRH-A2 12μg，DOM 5mg、HCG 600IU，生理盐水5ml；亲鱼暂养水温28℃，12—15小时后挤压鱼腹，收集鱼卵；抽取上述异源精子加入鱼卵中，混匀，再加入适量精子激活液，搅拌均匀，静置2分钟授精工作即完成；

C、雌核二倍体的诱导，上述人工授精时，遗传失活的异源精子不参与受精卵的发育，只有雌鱼鱼卵发育而产生单倍体，而单倍体苗是无法存活的，为此，通过冷休克方法，阻断减数分裂第二极体排出而诱导出雌核二倍体，由于黄颡鱼的性别控制机制为雄性配子异型，雌性配子同型，所以♀XX雌核发育子代为全雌子代；

第二代雌核发育：将第一代雌核发育子代培育至性成熟的雌鱼，按上述方法进行第二代雌核发育，便可得到基因位点完全纯合的纯系黄颡鱼全雌子代；

纯系黄颡鱼全雌鱼种质库的建立：第二代雌核发育获得的纯系黄颡鱼全雌鱼♀XX，开口6天后，取出其中500尾进行人工转性，获得具有正常生育能力的生理雄鱼♂XX，将纯系全雌鱼♀XX和生理雄鱼♂XX培育至性成熟后，杂交扩群，建立纯系黄颡鱼全雌鱼种质库，大量生产纯系黄颡鱼全雌鱼供大规模繁殖纯系全雄杂交黄颡鱼作母本；

(2)建立纯系瓦氏黄颡鱼全雌鱼种质库，选育纯系瓦氏黄颡鱼全雌鱼♀XX，并建立纯系瓦氏全雌鱼种质库，其操作过程与上述纯系黄颡鱼全雌鱼的相同，仅是亲鱼由野生原系黄颡鱼雌鱼改为野生原系瓦氏黄颡鱼雌鱼；